人组织金属蛋白酶抑制因子-3的分离纯化及其生物学性质

目的:从人胎盘中分离、纯化组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3),并对其对基质金属蛋白酶1(MMP1)的抑制作用进行评价。方法:利用含4mol/L尿素的TrisHCl缓冲液(pH8.0),从除去多数水溶性蛋白的胎盘匀浆液中提取难溶性蛋白。经CM52阳离子交换树脂和SephacrylS200凝胶过滤两步柱层析纯化后,用SDSPAGE鉴定TIMP3的纯度;用EIA和Westernblot检测TIMP3的含量;用免疫荧光测定法检测TIMP3对MMP1的抑制活性。结果:人胎盘来源的TIMP3由相对分子质量(Mr)为24000的非糖化蛋白和Mr为27000的糖化蛋白组成。非糖基化的TIMP3对MMP1的IC50为1.1×10-10mol/L,糖基化的TIMP3为1.2×10-10mol/L,显著高于重组的TIMP3(IC50为8×10-8)。结论:人胎盘来源的TIMP3由Mr为24000的非糖基化蛋白和Mr为27000的糖基化蛋白两部分组成,二者对MMP1均具有明显的抑制作用。