| 结核分枝杆菌Rv1246c和Rv1247c基因的重组质粒构建及蛋白表达 |
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| 引用本文： | 姚素霞,鲍朗,商正玲,张会东.结核分枝杆菌Rv1246c和Rv1247c基因的重组质粒构建及蛋白表达[J].中国人兽共患病杂志,2007,23(2):142-145,148. |
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| 作者姓名： | 姚素霞 鲍朗 商正玲 张会东 |
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| 作者单位： | 四川大学华西医学中心感染免疫研究室 成都610041 |
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| 摘 要： | 目的应用生物信息学方法分析结核分枝杆菌的Rv1246c和Rv1247c所编码蛋白的结构特征,并对其进行克隆和表达。方法利用Bioedit、Dnaman及Pfam等对Rv1246c和Rv1247c所表达蛋白结构进行分析;以结核分枝杆菌H37Rv的基因组为模板,用PCR分别扩增Rv1246c和Rv1247c基因片段,并重组到原核表达载体pET32a( )中,转化E.coliBL21(DH3)菌株,用IPTG诱导蛋白表达。通过SDS-PAGE及Western-blot免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况。用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗体效价。结果生物信息学分析表明它们与大肠杆菌的relBE家族有相似的蛋白模块,Rv1246c蛋白与大肠杆菌RelE同源性是21.55%,Rv1247c同源性是23.85%;两个重组质粒构建成功;通过SDS-PAGE检测分别在31kD和29kD处有特异性条带;Western-blot免疫印迹出现特异性阳性信号;间接ELISA检测多克隆抗体效价均大于1:40 000。结论本研究首次成功构建了结核分枝杆菌的Rv1246c和Rv1247c的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了Rv1246c和Rv1247c蛋白,为进一步研究该组基因的分子功能奠定了良好基础。
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| 关 键 词： | 结核分枝杆菌 蛋白表达 |
| 文章编号： | 1002-2694（2007）02-0142-04 |
| 修稿时间： | 2006-07-102006-08-28 |
Construction of the prokaryotic expression vector with Rv1246c and Rv1247c genes of Mycobacterium tuberculosis and its expression in E.coli |
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| YAO Su-xia,BAO Lang,SHANG Zheng-ling,ZHANG Hui-dong.Construction of the prokaryotic expression vector with Rv1246c and Rv1247c genes of Mycobacterium tuberculosis and its expression in E.coli[J].Chinese Journal of Zoonoses,2007,23(2):142-145,148. |
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| Authors: | YAO Su-xia BAO Lang SHANG Zheng-ling ZHANG Hui-dong |
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| Institution: | Institute of Infection and Immunity of West China Medical Center ,Chengdu 610041 ,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Rv1246c Rv1247c |
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