| 百日咳杆菌毒素S_1亚单位与谷胱甘肽S-转移酶融合基因在大肠杆菌中表达及其一步纯化 |
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| 引用本文： | 郑波,程继忠,皇甫永穆,海涛,戴五星,王建平.百日咳杆菌毒素S_1亚单位与谷胱甘肽S-转移酶融合基因在大肠杆菌中表达及其一步纯化[J].华中科技大学学报(医学版),1999(1). |
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| 作者姓名： | 郑波 程继忠 皇甫永穆 海涛 戴五星 王建平 |
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| 作者单位： | 同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室，同济医科大学公共卫生学院劳动卫生与职业病教研室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金,卫生部基金 |
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| 摘 要： | 研究了百日咳杆菌毒素Ｓ１亚单位与谷胱甘肽Ｓ－转移酶融合蛋白（ＧＳＴ－Ｓ１）在大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达，并一步纯化了重组ＧＳＴ－Ｓ１。首先用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出长度为５６０ｂｐ的编码百日咳毒素Ｓ１亚单位的ＤＮＡ片段。该片段比原编码Ｓ１蛋白的ＤＮＡ片段在其３′端缺失了１３８个碱基，将其按正确的阅读框克隆入质粒ｐＧＥＸ中ＧＳＴ基因的３′端，构成ＧＳＴ－Ｓ１融合基因表达载体ｐＧＥＸ－Ｓ１。经异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导表达和十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），可见所表达的ＧＳＴ－Ｓ１融合蛋白存在于细菌上清，为可溶性蛋白。分子量为４９ｋｕ处有明显的蛋白表达带。用谷胱甘肽（ＧＳＨ）亲和层析系统，一步纯化出ＧＳＴ－Ｓ１融合蛋白。最后经凝血酶的消化，得到２３ｋｕ的重组百日咳杆菌毒素Ｓ１亚单位蛋白。为百日咳疫苗的发展提供了依据
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| 关 键 词： | 百日咳杆菌毒素S_1亚单位 基因表达 疫苗 大肠杆菌 |
Expression of Fused Gene for PTX S 1 with GST in Eschrichia Coli and Single step Purification of Its Products |
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| Zheng Bo,Cheng Jizhong,Huangfu Yongmu et al.Expression of Fused Gene for PTX S 1 with GST in Eschrichia Coli and Single step Purification of Its Products[J].Journal of Huazhong University of Science and Technology(Health Sciences),1999(1). |
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| Authors: | Zheng Bo Cheng Jizhong Huangfu Yongmu |
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| Institution: | Zheng Bo,Cheng Jizhong,Huangfu Yongmu et al Department of Medical Molecular Biology,Research Center of Experimental Medicine,Tongji Medical University,Wuhan 430030 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | bordetella pertussis toxin S 1 subunit gene expression vaccine Eschrichia coli |
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