| 周期型马来丝虫HSP70基因原核表达载体的构建及表达产物的分析 |
| |
| 引用本文： | 方政,吴建军,陈阳,黄为群,姜声扬,石佑琴. 周期型马来丝虫HSP70基因原核表达载体的构建及表达产物的分析[J]. 中国地方病学杂志, 2006, 25(5): 494-496 |
| |
| 作者姓名： | 方政 吴建军 陈阳 黄为群 姜声扬 石佑琴 |
| |
| 作者单位： | 226001,南通大学基础医学院寄生虫学教研室 |
| |
| 基金项目： | 江苏省教育厅自然科学研究计划项目(02KJD310002) |
| |
| 摘 要： | ![]()
目的在大肠埃希菌宿主系统中表达周期型马来丝虫热休克蛋白70(HSP70)基因,并对表达产物进行SDS-PAGE分析。方法以重组质粒pGEM-T-HSP70为模板,根据报道的HSP70基因序列设计合成一对引物,用PCR法扩增HSP70基因(包括完整开放读码框架片段及其上下游序列共长2 198 bp),PCR产物定向插入原核表达载体pGEX-4T-3中,构建的重组质粒pGEX-4T-3-HSP70经双酶切鉴定。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导GST．Tag融合蛋白的表达,经SDS-PAGE分析并经凝胶图像分析确定目的蛋白的表达水平。结果重组表达质粒pGEX-4T-3-HSP70全长约7 200 bp,经双酶切后应得到长度为4 968 bp的载体和2 198 bp的目的基因2个片段,1%琼脂糖凝胶电泳显示结果同预期完全相符。HSP70相对分子质量(Mr)为70×10~3,质粒pGEX-4T-3的融合部分(GST．Tag)表达产物的Mr约为26×10~3,将重组质粒转化BL-21 (DE3)菌,经IPTG诱导表达,菌体蛋白的SDS-PAGE图谱显示,诱导组出现特异性蛋白表达条带,其Mr约100×10~3,与预计大小相同。目的蛋白占菌体总蛋白的12%左右。结论成功地构建了重组原核表达载体pGEX-4T- 3-HSP70：周期型马来丝虫HSP70基因可在大肠埃希菌中稳定表达,为制备和纯化表达蛋白以及丝虫病疫苗的进一步研究打下基础。
|
| 关 键 词： | 周期型马来丝虫 热休克蛋白质70 基因重组 基因表达 |
| 收稿时间： | 2006-01-16 |
| 修稿时间： | 2006-01-16 |
Expression of periodic Brugia malayi HSP70 gene and expressed protein analysis by SDS-PAGE |
| |
| FANG Zheng,WU Jian-jun,CHEN Yang,HUANG Wei-qun,JIANG Sheng-yang,SHI You-qin. Expression of periodic Brugia malayi HSP70 gene and expressed protein analysis by SDS-PAGE[J]. Chinese Jouranl of Endemiology, 2006, 25(5): 494-496 |
| |
| Authors: | FANG Zheng WU Jian-jun CHEN Yang HUANG Wei-qun JIANG Sheng-yang SHI You-qin |
| |
| Abstract: | ![]()
|
| |
| Keywords: | Periodic Brugia malayi Heat-Shock proteins 70 Recombinant DNA Gene expression |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
