驴皮药材RAPD分析方法建立及其与伪品马皮的鉴别

目的 建立驴皮药材RAPD分析方法并用于伪品马皮的鉴别。方法 采用化学试剂盒法确定了驴皮药材中DNA提取的最佳条件，采用L₁₆(4⁵) 正交设计方法，针对Taq酶、Mg²⁺、dNTP、模板DNA、引物设计了5因素4水平的正交试验，优化了RAPD-PCR反应条件。结果 驴皮药材RAPD-PCR反应体系的最佳条件为25 μL反应体系中含有Taq酶1.5 U、Mg²⁺ 0.15 mmol/L、dNTP 0.25 mmol/L、模板DNA 1.5 μL、引物0.5 μmol/L；PCR反应条件为95 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，37 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共30个循环，最后72 ℃延伸7 min。RAPD反应结果中300～400 bp处的条带可作为鉴别驴皮及其伪品的特异性条带。结论 所建立的RAPD分析方法具有简便快捷、稳定性好、重现性高的特点，可用于驴皮药材及其伪品马皮的鉴别。

Establishment of RAPD for analysis on furs of Equus asinus and discrimination from Equus caballus orientalis