| 人细胞角蛋白8(CK8)基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 李薇,寻萌,楚雍烈,郑建武. 人细胞角蛋白8(CK8)基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2010, 26(1) |
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| 作者姓名： | 李薇 寻萌 楚雍烈 郑建武 |
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| 作者单位： | 西安交通大学医学院免疫与病原生物系分子病毒研究所,陕西,西安,710061 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | ![]()
目的:克隆人细胞角蛋白8(CK8)基因cDNA并在大肠杆菌中表达CK8蛋白产物。方法:运用DNA重组技术,设计CK8基因特异引物,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肝细胞癌7721细胞中扩增CK8编码区cDNA,将其插入克隆载体pMD18-T simple vector中,获得重组质粒pMD18-CK8,转化感受态大肠杆菌DH5α。继而采用PCR技术从重组质粒pMD18-CK8中扩增出约1500bp目的片段,再次级克隆到原核表达质粒pET-28a(+)载体中,获得pET-28a-CK8重组原核表达质粒;经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21(DE3)菌株,在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达。采用SDS-PAGE电泳及Western blot检测CK8蛋白表达水平。结果:成功建立了人CK8基因cDNA重组体的无性繁殖系。②在原核细胞中成功地表达出人CK8蛋白,该蛋白具有很好的免疫原性。结论:运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了人细胞角蛋白8(CK8)基因,为进一步研究CK8的基因型及探讨该基因编码的CK8蛋白的性质和生物学活性创造条件。
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| 关 键 词： | 人细胞角蛋白8CK8 基因克隆 原核表达 |
Cloning and expression of human keratin 8 gene cDNA in E.coli |
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| Abstract: | ![]()
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| Keywords: | cytokeratin 8(CK8) gene cloning gene expression |
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