趋化因子SDF-1β在大肠杆菌中的表达及其纯化 |
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引用本文: | 郑红,朱锡华.趋化因子SDF-1β在大肠杆菌中的表达及其纯化[J].第三军医大学学报,2001,23(1):62-65. |
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作者姓名: | 郑红 朱锡华 |
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作者单位: | 1. 第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所, 2. James Graham Brown Cancer Center, University of Louisville, |
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摘 要: | 目的 重组人SDF 1 β在大肠杆菌中表达并获得纯化的有生物学活性的SDF 1 β蛋白。 方法 以pET32a( + ) SDF 1为人SDF 1 β克隆基因的表达载体 ,以大肠杆菌AD494(DE3)pLysS为表达菌 ,在IPTG诱导下表达出一个由 2 30个氨基酸残基组成的硫氧还蛋白 (thioredoxin) SDF 1 β的融合蛋白 ( 2 6× 1 0 3)。经细菌裂解、金属离子螯合亲和层析、肠激酶消化以游离SDF 1 β、阳离子交换层析和逆向高效液相层析等步骤纯化目的蛋白。以蛋白印迹、纯化产物的N端氨基酸测序及配体结合试验、微生理监测术鉴定纯化产物的生化性质及生物学活性。结果 在经诱导的发酵菌中融合蛋白占总菌体蛋白的 1 0 %~ 1 5 %。从 1L发酵菌液中可获得高纯度目的蛋白约 40 0 μg。蛋白印迹实验及N端氨基酸测序皆证实纯化终产物为SDF 1 β(由 71个氨基酸残基组成 ,7.8× 1 0 3)。配体结合试验及Cytosensor表明 ,该产物能与CXCR4结合 Kd =( 1 2 .2 0± 2 .99)nmol L]并引起CXCR4表达细胞的信号传导。结论 采用本方法可获得高表达的 ,高纯度的具有与天然SDF 1 β相似活性的重组人SDF 1 β。
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关 键 词: | 趋化因子 趋化因子受体 SDF-1β CXCR4 表达 纯 |
文章编号: | 1000-5404(2001)01-0062-04 |
修稿时间: | 2000年10月17 |
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