人神经菌毛素1 b结构域单克隆抗体的制备及其抑制血管生成作用

目的：制备抗人神经菌毛素1（human neuropilin 1，HuNRP1）b结构域单克隆抗体（monoclonal antibodies，mAb），为靶向抑制肿瘤血管生成提供生物材料。方法：运用杂交瘤技术，将HuNRP 1 b结构域重组蛋白（TF-HuNRP1b）免疫BALB/c鼠，共免疫3次，取免疫鼠的脾脏细胞与sp2/0细胞进行融合，采用间接免疫荧光法（immunofluorescent assay，IFA）筛选稳定分泌抗HuNRP1b mA，以Western blot、IFA、流式细胞术分析mAb的特异性。以MTT法及小室迁移实验分析mAb抑制血管生成的能力。结果：获得1株稳定分泌抗HuNRP1b mAb的细胞株4F11。Western blot结果表明，本研究所获得的mAb 4F11只与重组HuNRP1b发生反应，与对照蛋白不发生反应；IFA及流式细胞分析结果表明，所获得的mAb能够识别肿瘤细胞MDA-MB-231、HepG2以及人脐静脉内皮细胞表达的天然HuNRP1蛋白；MTT法及小室迁移实验表明，所获得的mAb 4F11具有抑制人脐静脉内皮细胞增殖、迁移的能力。结论：成功制备出抗HuNRP1b的mAb，该mAb的获得将为进一步研究HuNRP1的功能及靶向抑制肿瘤血管生成提供生物材料。

Generation of monoclonal antibodies against human neuropilin 1 b domain and its inhibitory function on angiogenesis