转录因子ZNF191腺病毒表达载体的构建及鉴定

目的:构建转录因子ZNF191腺病毒表达载体,为进一步研究ZNF191的生物学功能与肿瘤的基因治疗奠定基础。方法:从HEK293细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增ZNF191基因,并将ZNF191亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV中,酶切及DNA测序鉴定后,将含ZNF191基因的重组穿梭质粒pAdTrack-ZNF191经PmeⅠ线性化后转化pAdEasy-1感受态细菌。pAdEasy-ZNF191质粒经PmeⅠ线性化后转染293T细胞,包装重组腺病毒Ad-ZNF191,并进行PCR鉴定、Westernblot检测受感染MCF-7细胞内ZNF191蛋白的表达。结果:证实pAdTrack-CMV-ZNF191及pAdEasy-ZNF191质粒构建正确,收获病毒后PCR及DNA测序结果证明Ad-ZNF191包装成功,腺病毒感染MCF-7细胞内ZNF191蛋白表达明显提高。结论:成功构建了ZNF191基因重组腺病毒表达载体Ad-ZNF191,为进一步研究ZNF191的生物学功能与肿瘤的基因治疗奠定基础。