优化人胃癌细胞SGC-7901细胞骨架图像的激光共聚焦显微技术

目的利用激光共聚焦技术,对比三种固定液不同固定时间对胃癌细胞系SGC-7901的细胞骨架荧光染色的影响。方法选择三种常用固定液:2.5%戊二醛,4%多聚甲醛及95%乙醇,对接种24h后的SGC-7901细胞分别进行10min,20min及30min等不同时间点固定,5%BSA(含0.2%Triton X-100)封闭透膜1h,荧光抗体FITC标记的鬼笔环肽37℃避光孵育2h,DAPI室温染核15min,激光共聚焦扫描显微镜扫描,对比观察其染色结果。结果三种固定液及不同固定时间对SGC-7901细胞骨架染色效果不尽相同。95%乙醇固定后微丝之间区分不明,排列混乱,无网状结构,染色效果与固定时长无关。2.5%戊二醛固定后微丝结构完整,但层次不清晰。4%多聚甲醛固定后微丝结构完整,层次清晰,固定20min及30min微丝荧光染色清晰。结论 4%多聚甲醛固定20min对细胞骨架固定效果最好,荧光染色标记结果为后续细胞骨架功能研究优化实验方法并提供理论依据。

Optimization of cytoskeleton observation of human gastric cancer cell line SGC-7901 by laser scanning confocal