靶向bcl-2基因转录shRNA重组质粒的构建和筛选 |
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引用本文: | 孙桦,李光明,刘博伟,胡俊杰,李定国.靶向bcl-2基因转录shRNA重组质粒的构建和筛选[J].上海交通大学学报(医学版),2008,28(2):224-227. |
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作者姓名: | 孙桦 李光明 刘博伟 胡俊杰 李定国 |
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作者单位: | 上海交通大学医学院新华医院消化内科 上海200092 |
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摘 要: | 目的构建能高效抑制肝星状细胞(HSCs)bcl-2表达的小发夹RNA(shRNA)重组质粒。方法利用RNA干扰技术,设计有小发夹结构的3条DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至转录载体psiRNA-hH1neo上构建重组质粒,予以酶切和测序鉴定。重组质粒转染HSC-T6细胞株,运用实时荧光定量PCR和Western blotting进行筛选鉴定。结果酶切及测序鉴定表明,成功构建重组质粒shRNA1、shRNA2和shRNA3。实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果显示,shRNA1和shRNA2转染后显著抑制HSC-T6中bcl-2mRNA和蛋白表达(P<0.05),其中siRNA1的bcl-2表达抑制效率>80%。结论构建的重组质粒shRNA1能有效抑制HSCs中bcl-2的表达。实验为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径奠定了基础。
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关 键 词: | RNA干扰 bcl-2 重组质粒 肝星状细胞 |
文章编号: | 0258-5898(2008)02-0224-04 |
收稿时间: | 2007-10-12 |
修稿时间: | 2007年10月12 |
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