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目的研究靶向下调上皮细胞黏附分子(ECAM)对结直肠癌干细胞增殖、侵袭及药物敏感性的影响。方法用肿瘤微球法从人结直肠癌细胞系LoVo中获取结直肠癌干细胞,用结直肠癌干细胞表面特殊标志物[ECAM和人类细胞分化抗原44(CD44)]对其进行鉴定并进行后续研究。用lipofectamine 2000脂质体介导完成转染,根据处理方法不同将细胞分为3组:实验组(ECAM抑制组),对照组(转染公共抑制剂lipofectamine 2000-抑制剂),空白组(不作任何处理),并进行培养,取3组对数期的细胞分别给予几个浓度(1,5,10,15,20,25,30,35,40,45,50 mg·L-1)伊立替康和几个浓度(50,100,150,200,250,300,350,400,450,500,550,600 mg·L-1)卡培他滨,继续培养。用实时荧光定量检测用药前后3组细胞中ECAM mRNA的表达水平,用噻唑蓝(MTT)法检测用药前后3组细胞的增殖能力和药物敏感性,用Transwell小室检测3组细胞的侵袭能力。结果在富集前后的LoVo细胞系中,EpCAM^+CD44^+双阳结直肠癌干细胞的百分率分别是0.95%,85.78%,与富集前比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。空白组、对照组和实验组中EpCAM mRNA的表达水平分别为8.17±0.64,7.94±0.83,2.16±0.12,对照组和实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),说明3组细胞构建成功。空白组、对照组和实验组中侵袭细胞分别为79.22±5.25,80.12±4.89,31.23±2.36。对照组和实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。空白组、对照组与实验组的伊立替康对结直肠癌干细胞的IC50分别为(20.25±4.35),(19.22±3.99),(10.24±2.04)mg·L-1;这3组的卡培他滨对结直肠癌干细胞的IC50分别为(320.13±23.65),(315.79±21.03),(250.22±15.45)mg·L-1,实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论靶向下调ECAM可以有效地抑制结肠癌干细胞增殖及侵袭能力,同时增强其对药物的敏感性。
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