氟铝及联合作用对体外培养大鼠破骨细胞数量及骨吸收功能的影响

目的 观察单纯氟、铝及氟铝联合作用对体外培养大鼠破骨细胞功能的影响,探讨其作用机制.方法 机械分离法作用于新生SD大鼠四肢长骨,于TC199培养液(含10％胎牛血清)中获得破骨细胞和骨髓基质细胞,将破骨细胞接种于96孔培养板和象牙薄切片培养,骨髓基质细胞接种于6孔培养板培养.2h后换液并染毒(氟化钠和氯化铝),分为对照组(氟化钠和氯化铝浓度均为0 mol/L)、氟组(氟化钠1.0×10-4 mol/L)、铝组(氯化铝1.0×10-5 mol/L)和氟铝联合组(氟化钠1.0×10-4 mol/L,氯化铝1.0×10-5 mol/L).培养5d后,对培养板中破骨细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,光镜下检查破骨细胞数目;象牙薄切片经1％甲苯胺蓝染色,光镜下分析破骨细胞骨吸收陷窝面积.骨髓基质细胞染毒培养8h后提取总RNA,实时荧光PCR法测定骨保护素(OPG)和细胞核因子κβ受体活化因子配体(RANKL)的表达量水平.结果 ①氟、铝、氟和铝的交互作用对破骨细胞数量均有影响(F值分别为7.15、6.56、7.98,P均＜0.05),氟组、铝组及氟铝联合组破骨细胞数量[(136.9±22.99)、(135.4±23.5)、(163.0±24.4)个/孔]均高于对照组[(92.5±22.1)个/孔,P均＜0.05],氟铝联合组高于氟组和铝组(P均＜0.05).②氟组、铝组及氟铝联合组对破骨细胞骨吸收陷窝面积均有影响(F值分别为10.47、12.64、14.29,P均＜0.05),氟组、铝组及氟铝联合组骨吸收陷窝面积[(0.242±0.031)、(0.293±0.026)、(0.333±0.016)mm2/片]均高于对照组[(0.088±0.030)mm2/片,P均＜0.05],氟铝联合组高于氟组和铝组(P均＜ 0.05).③氟、铝、氟和铝的交互作用对RANKL/OPG mRNA表达量的比值均有影响(F值分别为8.15、15.38、23.59,P均＜0.05),氟组、铝组、氟铝联合组[(193.98±137.93)％、(326.11±176.78)％、(599.84±275.82)％]均高于对照组[(100.00±56.02)％,P均＜0.05],氟铝联合组高于氟组和铝组(P均＜0.05).结论 氟、铝均可引起体外培养破骨细胞数量增多,促进其分化、增强骨吸收活性,该作用可能与其上调RANKL/OPG mRNA表达量比值有关.同时,氟铝联合作用对破骨细胞活性的刺激有叠加效果.

Impact of fluorine and aluminum and both action combined on the number of rat osteoclasts and bone resorption cultured in vitro