黄绿青霉素对心肌细胞线粒体呼吸链合成相关转录调节基因mRNA表达、膜电位及活性氧的影响

目的 观察黄绿青霉素(CIT)对SD大鼠原代心肌细胞线粒体呼吸链合成相关转录调节基因mRNA表达、膜电位及活性氧的影响.方法 用不同浓度CIT0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 μmol/L]作用SD大鼠原代心肌细胞24 h,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,并根据检测结果,用SPSS 13.0软件计算CIT的半数抑制浓度(IC50).进一步选择心肌细胞存活率为99％、95％、90％时的CIT水平(0.715、1.234、1.650 μmol/L)作为低、中、高剂量组,同时以未加CIT作为对照组,分别作用于心肌细胞24 h,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌细胞中过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(Nrf1)、核呼吸因子2(Nrf2)mRNA表达；分别以阳离子荧光羰花青染色剂(JC-1)、2',7'-二氯荧光素(DCFH2-DA)作为荧光探针,用全能酶标仪检测心肌细胞线粒体膜电位(MMP)和细胞内活性氧(ROS)的变化.结果 与0μmol/L CIT组(89.4±17.6)％]比较,2～ 10 μmol/L CIT组原代心肌细胞存活率(80.2±20.2)％、(74.4±18.7)％、(63.2±8.9)％、(51.5±18.8)％、(39.0±15.7)％、(22.6±10.5)％、(19.9±4.9)％、(20.7±4.8)％、(18.5±3.3)％]明显下降(P均＜ 0.05).CIT作用于心肌细胞24 h的IC50为4.6 μmol/L.高、中、低剂量组PGC-1α mRNA表达(0.431±0.041、0.619±0.031、0.653±0.037)较对照组(0.776±0.081)明显降低(P均＜0.05)；高剂量组Nrf1mRNA表达(0.358±0.051)明显低于对照组(0.580±0.098,P＜0.05)；高、中剂量组Nrf2 mRNA表达(0.352±0.041、0.472±0.011)明显低于对照组(0.667±0.091,P均＜0.05).与对照组(100.00±0.00)％、(100.00±0.00)％]比较,高、中、低剂量组MMP水平(55.3±3.3)％、(69.8±4.7)％、(81.8±2.7)％]显著降低(P均＜0.05),ROS水平(606.0±46.3)％、(275.0±53.5)％、(158.9±29.5)％]显著升高(P均＜0.05).结论 CIT可对原代心肌细胞的线粒体呼吸链生物合成产生抑制作用,并诱导细胞发生氧化应激,通过线粒体途径介导心肌细胞死亡,从而引起心肌损伤.