甲型H1N1流感病毒单克隆抗体的制备及其功能研究

目的获得分泌特异性抗H1N1亚型（A/California/04/2009）猪流感病毒单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞并探索其分泌抗体的功能。方法以表达血凝素蛋白H1（A/California/04/2009）的DNA疫苗为免疫原,免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS1骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过间接ELISA筛选分泌抗H1N1亚型（A/California/04/2009）抗体的杂交瘤细胞,进一步亚克隆筛选单一、稳定分泌其抗体的细胞株。结果获得能稳定分泌抗流感病毒血凝素H1亚型的单克隆抗体杂交瘤4株,分别命名为41H2、68E5、41E7和26D11。其中68E5、41E7和26D11为IgG1（K）,41H2为IgG2a（K）。运用Lenti-pseudovirus方法测试显示,26D11可识别结构性位点,具有H1N1（A/California/04/2009）专一性较强的中和能力,是中和性抗体。Western blot检测显示,41H2和41E7为阳性,识别线性位点。特异性实验表明,26D11只与H1（A/California/04/2009）亚型流感病毒发生特异性反应,而不与其他16个HA亚型流感病毒发生交叉反应,显示出良好的特异性。结论用单克隆抗体杂交瘤技术成功制备了甲型H1N1流感病毒的单克隆抗体。