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| NT-3基因逆转录病毒表达载体的构建 | |
| 作者姓名： | 董智勇 李忱 陈东 孟晓婷 陈雷 路来金 |
| 作者单位： | 1. 吉林大学白求恩医学院,吉林,长春,130021 2. 广东医学院组织学与胚胎学教研室,广东,东莞,523808 3. 吉林大学第一医院手外科,吉林,长春,130021 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，吉林省科技发展计划资助项目 |
| 摘 要： | 目的:分离大鼠神经营养素-3(NT-3)基因, 构建pLEGFP-NT3逆转录病毒表达载体.方法:利用RT-PCR技术钓取大鼠NT-3基因, 克隆到测序载体pMD18-T中, 测序后再亚克隆到逆转录病毒载体pLEGFP-C1中, 通过Lipofectamine 2000导入包装细胞PA317.结果:RT-PCR产物为776 bp, 经测序鉴定虽与GenBank中NT-3基因的序列相差1个碱基, 但不影响NT-3蛋白质的表达;构建的pLEGFP-NT3重组载体经酶切鉴定,证实NT-3基因片段正确插入pLEGFP-C1载体中.转染包装细胞后, 激光共聚焦显微镜下观察导入NT-3基因的PA317细胞发绿色荧光.结论:分离得到了大鼠NT-3基因成功构建了pLEGFP-NT3表达载体. |
| 关 键 词： | 神经营养素3 逆转录病毒载体 重组 |
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