| 雌激素受体α基因shRNAi慢病毒载体的构建与滴度测定 |
| |
| 作者姓名： | 曾宪旭 班振英 党秋红 楚天骄 雷冬梅 |
| |
| 作者单位： | 450052,郑州大学第三附属医院病理科 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目,河南省教育厅科学技术研究重点项目 |
| |
| 摘 要： | 目的:构建雌激素受体(ER)α基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,检测病毒感染细胞的滴度.方法:针对已经筛选确定的ERα基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoR Ⅰ酶切后的pGCsil-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生 shERα-LV慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用shERα-LV载体、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0质粒共转染包装293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果:PCR和测序证实,成功构建ERα shRNA的慢病毒载体shERα-LV.包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为2×108 TU/mL.结论:成功构建人ERα基因RNAi慢病毒载体,为ERα在乳腺癌发生发展中的研究提供了基础.
|
| 关 键 词： | RNA干扰 乳腺肿瘤 雌激素受体α 遗传载体 质粒 癌 绿色荧光蛋白质类 |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
