| 早、晚代MEF用于人胚胎干细胞培养的能力差异及分泌机制 |
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| 引用本文： | 周家宝,全湛柔,黄春燕,李远全,钟观清,刘玉生,王登川,朱朱,石本艳. 早、晚代MEF用于人胚胎干细胞培养的能力差异及分泌机制[J]. 中国热带医学, 2016, 0(2): 111-115. DOI: 10.13604/j.cnki.46-1064/r.2016.02.04 |
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| 作者姓名： | 周家宝 全湛柔 黄春燕 李远全 钟观清 刘玉生 王登川 朱朱 石本艳 |
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| 作者单位： | 1. 广东医学院东莞科研中心衰老研究所,广东东莞523808;广东医学院医学检验学院,广东东莞523808;2. 广东医学院东莞科研中心衰老研究所,广东东莞523808;广东医学院第二临床学院,广东东莞523808;3. 东莞市人民医院整形美容科,广东东莞,5230595;4. 广东医学院东莞科研中心衰老研究所,广东东莞523808;广东省医学分子诊断重点实验室,广东东莞523808;5. 广东医学院研究生学院,广东东莞,523808 |
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| 基金项目： | 广东省医学科研基金,东莞市社会科技发展项目,广东医学院博士启动基金,大学生创新创业项目 |
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| 摘 要： | 目的比较早、晚代小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEF)维持人胚胎干细胞(Humanembryonic stem cells,h ESCs)正常生长的能力差异,并从分泌因子角度探讨其机制,为开发基于晚代MEF的h ESCs培养体系奠定基础。方法以P3或P9代MEF为饲养层培养h ESCs;通过添加碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblastgrowth factor,b FGF)调节MEF分泌因子表达;用β-半乳糖苷酶活性染色检测细胞衰老;用定量RT-PCR检测基因的m RNA表达水平;用ELISA检测TNF-a的分泌量。结果 P3代MEF增殖较快,能维持h ESCs正常增殖,而P9代MEF呈现衰老表型,不能维持h ESCs正常增殖。P9代MEF表达多种分泌因子(Grem1、Tgfb1、Inhba、Bmp4和Tgfb2)及衰老相关分泌表型(Senescence-associated secretory phenotype,SASP)因子(Il-1a和Tnfa)的水平均明显高于P3代MEF。加入b FGF后,P3和P9代MEF的Grem1、Tgfb1和Inhba的表达均明显升高,而Bmp4和Tgfb2表达均下降。结论 P9代MEF保留对b FGF的反应性,但有明显衰老表型及SASP,SASP的出现可能是P9代MEF不能维持h ESCs正常生长的重要原因。
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| 关 键 词： | 胚胎干细胞 碱性成纤维细胞生长因子 小鼠胚胎成纤维细胞 细胞衰老 分泌 |
The capacity variance and secretory mechanisms of early and late generation of MEF in cultivation of human embryonic stem cells |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Embryonic stem cells Basic fibroblast growth factor Mouse embryonic fibroblasts Senescence Secretion |
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