雄激素受体基因第一外显子区CAG缺失的构建及其在HEK293细胞中的表达

目的：构建雄激素受体基因第一外显子区CAG重复序列缺失的突变重组体，观察CAG重复序列的有，无对雄激素受体转录及表达的调控作用。方法：实验于2006—05／2007—05在解放军总医院老年医学研究所完成。按照重叠延伸反应的原理扩增CAG重复序列两端的基因片段，再将两片段混合，在加入一个引物的情况下进行8个PCR循环以有效完成重叠延伸，然后再加入另一引物进行22个循环，完成目的片段指数扩增，将目的片段克隆至真核表达载体PAR-IRES2-EGFP，转染HEK293细胞，采用Western blot法检测HEK293细胞雄激素受体蛋白。结果：构建的CAG重复序列缺失的突变重组体经酶切鉴定和DNA测序证实构建正确，转染真核细胞可检测到雄激素受体基因的表达。结论：重叠延伸PCR是进行体外基因拼接、体外缺失突变的简单、快速的基因重组技术；雄激素受体基因第一外显子区CAG重复序列缺失的突变重组体的成功构建可为今后的相关研究提供实验基础。

Construction and expression of human androgen receptor exon 1 CAG repeat deletion mutant in HEK293 cells