地塞米松对液氮深低温保存猪角膜浸润细胞的影响

目的：本实验结合液氮深低温冻存技术与地塞米松预处理方法,研究其对猪角膜免疫原性影响情况及可能机制。

方法：选择新鲜猪角膜,以13mm直径环钻制取角膜标本,依次放入四种冷冻保护液中冷平衡,“简化四步法”程序降温后放入液氮中保存,使用前40℃水浴复温。地塞米松作用组以同法制备植片,前三步冷平衡同前,最后分别放入含0.01,0.03,0.05mg/mL地塞米松保护液中4℃孵育18h,再程序降温液氮冻存。BALB/c小鼠50只,随机分为阳性对照组(新鲜组)、程序冻存组、地塞米松程序冻存组Ⅰ、地塞米松程序冻存组Ⅱ和地塞米松程序冻存组Ⅲ,每组10只。各组角膜植入到BALB/c小鼠背部皮下,术后14d取出,做石蜡包埋,HE染色、CD25和FasL免疫组化染色,光镜观察。

结果：术后14d剖取角膜植片,见植片与周围组织粘连,植片明显肿胀,半透明,色微黄。HE染色结果：新鲜组角膜植片全层有大量淋巴细胞浸润; 程序冻存组角膜浸润细胞较新鲜组减少,多位于内皮和上皮层分布; 地塞米松作用各组细胞浸润数最少。免疫组化显示：新鲜组植片CD25⁺和FasL⁺浸润细胞数最多,与程序冻存组、各地塞米松作用组比较有明显统计学差异。程序冻存组CD25⁺和FasL⁺浸润细胞数多于各地塞米松作用组,比较有显著性差异。各地塞米松作用组CD25⁺和FasL⁺浸润细胞数差异比较无统计学意义。

结论：地塞米松作用组角膜免疫原性最低。各地塞米松作用组角膜免疫原性在0.01～0.05mg/mL范围内无浓度依赖效应。