淫羊藿苷抑制 Aβ25-35诱导的 N2a 细胞自噬及减少细胞内外 Aβ 的实验研究

目的 研究淫羊藿苷（ICA） 对 β-淀粉样蛋白肽 25-35（Aβ25-35） 诱导的小鼠神经瘤母细胞（N2a）Aβ 含量和自噬溶酶体途径的影响。 方法 N2a 细胞培养基加入不同浓度的 ICA （0.05、0.1、0.2 μmol/L）孵育 6 h，再将 20 μmol/L 老化的 Aβ25-35 处理 24 h。 实验分为 5 组院对照组（DMSO）、AD 细胞模型组（ Aβ25-35 ）、0.05 μmol/L ICA 干预组（ Aβ25-35 +ICA0.05）、0.1 μmol/L ICA 干预组 （ Aβ25-35 +ICA0.1）、0.2 μmol/L ICA 干预组（Aβ25-35+ICA0.2）。 将 0.2 μmol/L 的 ICA 预处理 N2a 细胞 2、4、6 h，再加入 Aβ25-35 处理 24 h。 收集细胞和培养基，ELISA 法测定细胞内外 Aβ40 及 Aβ42 含量；免疫印迹法检测LC3、P62、p70S6K 及其苏氨酸 389 位点磷酸化（p-p70S6K，活性形式）的表达；采用细胞免疫荧光技术观察 LC3 和 4G8（识别 Aβ17-24 片段）的染色强度及 LAMP2 和 4G8 共定位情况。 结果 与对照组比较，AD细胞模型组细胞存活率降低（P<0.05），细胞内外 Aβ42 及 Aβ40 的含量增加（P<0.01，P<0.05），LC3II/LC3I和 P62 蛋白表达均增加（P<0.05），p- p70S6K 表达增加（P<0.01）。 与 AD 细胞模型组比较，0.05、0.1 和0.2 μmol/L ICA 干预组细胞活力下降（P<0.05），0.2 μmol/L ICA 干预组细胞内外 Aβ42 及 Aβ40 含量降低（P<0.05），0.1 和 0.2 μmol/L 干预组 ICALC3II/LC3I和 4G8 蛋白表达降低（P<0.05）。 0.2 μmol/LICA 预处理 4、6 h 可明显降低 AD 细胞模型细胞内外 Aβ42 和 Aβ40 的含量，降低 LC3域/ LC3玉和 P62 蛋白表达及 p- p70S6K/p70S6K（P<0.05）。 结论 ICA 可抑制 Aβ25-35 诱导的 N2a 细胞自噬，降低 p70S6K 活性并减少细胞内外 Aβ。