附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖和miR-155表达的影响

目的 观察附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖的影响，研究附子汤对miR-155表达的影响并进一步探讨其抗类风湿性关节炎的作用机制。方法 体外培养MH7A细胞，设空白组、附子汤高剂量组（25 g·L^-1）、低剂量组（12.5 g·L^-1）和硫酸羟氯喹阳性药组（0.006 25 g·L^-1），采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）试剂盒法检测细胞增殖，流式细胞术检测MH7A细胞周期的改变；应用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测药物处理后miR-155及其下游基因含SH2结构域的肌醇5-磷酸酶-1（SHIP-1）、蛋白激酶B3（Akt3）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR） mRNA表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、Akt3和mTOR的蛋白表达。结果 附子汤体外在质量浓度6.25 g·L^-1以上时，能明显抑制MH7A增殖，且呈明显的量-效关系和时-效关系。与空白组比较，附子汤高、低剂量组G₂/M期细胞比例均明显增加（P<0.05），高剂量组G₀/G₁期细胞比例明显降低（P<0.05），其细胞周期的阻滞作用呈明显的量效关系。与空白组比较，附子汤高、低剂量组miR-155的表达均明显下调（P<0.05）；附子汤高剂量组SHIP1 mRNA表达明显上调、Akt3 mRNA表达明显下调（P<0.05），附子汤高、低剂量组mTOR mRNA表达均明显下调（P<0.05）。与空白组比较，附子汤高、低剂量组的PI3K、Akt3和mTOR的蛋白表达均明显下调（P<0.05）。结论 附子汤对MH7A细胞增殖具有显著的抑制作用，作用机制与下调miR-155的表达，从而促进SHIP-1的表达，抑制其下游PI3K/Akt3/mTOR信号通路的基因表达有关。

Effect of Fuzitang on Proliferation of Human Rheumatoid Arthritis Synovial Fibroblast Cell Line MH7A and Expression of miR-155