治尪汤联合甲氨蝶呤调节RANKL/OPG通路改善胶原诱导关节炎大鼠骨破坏的作用机制

目的 探究治尪汤联合甲氨蝶呤改善胶原诱导关节炎模型（CIA）大鼠的骨破坏作用及机制。方法 SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组,甲氨蝶呤组（1.5 mg·kg^-1）,甲氨蝶呤+治尪汤低（40.8 g·kg^-1）,高（102.0 g·kg^-1）剂量组。除正常组外,其余大鼠分别于第1,7天尾部注射浓度为2 g·L^-1的Ⅱ型胶原乳剂50 μL建立CIA模型;第8天开始连续给药21 d,每7 d检测1次体质量、足趾厚度,进行关节炎指数（AI）评分,酶联免疫吸附测定法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-6（IL-6）,白细胞介素-1β（IL-1β）含量,抗酒石酸酸性磷酸酶染色法检测踝关节破骨细胞的数量,免疫组化（IHC）,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测踝关节核转录因子-κB受体活化因子配体（RANKL）,骨保护素（OPG）的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠体质量显著降低（P<0.01）,足趾厚度显著增加（P<0.01）,踝关节AI评分显著增加（P<0.01）,血清TNF-α,IL-6,IL-1β含量显著升高（P<0.01）,踝关节破骨细胞数量显著增加（P<0.01）,踝关节RANKL mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.01）,OPG mRNA和蛋白表达明显降低（P<0.05）,RANKL/OPG显著升高（P<0.01）。与模型组比较,甲氨蝶呤+治尪汤低、高剂量可改善大鼠体质量,降低足趾厚度,AI评分,RANKL mRNA和蛋白表达并增加OPG mRNA和蛋白表达,使RANKL/OPG降低（P<0.05,P<0.01）,且甲氨蝶呤+治尪汤高剂量效果最好,甲氨蝶呤+治尪汤低剂量次之,甲氨蝶呤再次之。结论 治尪汤联合甲氨蝶呤能更好地改善类风湿关节炎的骨破坏,可能是通过抑制RANKL/OPG通路实现的,本研究为中西医结合方案治疗类风湿关节炎骨破坏提供了实验基础。