基于网络药理学及体外实验验证探究丹参治疗膀胱癌的分子机制

目的 基于网络药理学预测丹参治疗膀胱癌（BC）的潜在作用靶点及可能相关的信号通路，并通过体外细胞实验验证其潜在的分子机制。方法 应用中药系统药理数据库（TCMSP）筛选中药丹参活性成分；运用GeneCards和在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）获取BC疾病靶点；通过Venny 2.1工具整合丹参治疗BC的潜在靶点并绘制韦恩图；STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络；DAVID数据库进行基因本体（GO）富集分析及京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析；细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测丹参酮Ⅱ_A（Tan Ⅱ_A），隐丹参酮（CPT），木犀草素（LUT）分别以不同浓度（0、1、2、4、8、16、32 μmol·L^-1）对膀胱癌T24、5637细胞的增殖抑制活性；碘化吡啶（PI）染色法分析Tan Ⅱ_A、CPT及LUT（0、4、8 μmol·L^-1）诱导5637细胞凋亡；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Tan Ⅱ_A（0、4、8、16 μmol·L^-1）对关键靶点蛋白表达的调控。结果 筛选结果显示丹参65个活性成分，39个丹参-BC共同作用靶点，KEGG通路富集分析主要包含神经元-配体-受体的相互作用、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号传导途径、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂抗性、缺氧诱导因子（HIF）-1信号通路等。CCK-8结果表明，与空白组比较，Tan Ⅱ_A、CPT及LUT均能明显抑制BC细胞T24和5637细胞的增殖（P<0.05），且3个药物均对5637细胞的增殖抑制作用更为显著；同时在5637细胞系中，Tan Ⅱ_A组的半抑制浓度（IC₅₀）明显低于CPT及LUT组（P<0.05）。PI染色结果显示，与空白组比较，Tan Ⅱ_A、CPT及LUT均能诱导5637细胞凋亡，诱导凋亡程度由高到低依次为Tan Ⅱ_A、CPT、LUT（P<0.05）。Western blot实验表明Tan Ⅱ_A作用于5637细胞后能降低表皮生长因子受体（EGFR）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K），磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白表达水平，且呈浓度依赖性。结论 丹参治疗BC具有多成分、多靶点、多通路的特点，其作用机制可能与下调EGFR、p-PI3K，p-Akt蛋白的表达，进而抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡有关。