基于自噬途径观察飞龙掌血醇提物对NSCLCA549细胞凋亡的影响

目的 观察飞龙掌血醇提物对NSCLCA549细胞自噬和凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。方法 体外培养A549细胞，采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞增殖的情况，并计算A549细胞的存活率，筛选出药物的浓度。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙锭（PI）法检测各组及加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）后细胞凋亡情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组及加入3-MA后凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、微管相关蛋白1轻链3 （LC3 Ⅱ）、活化的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved PARP1）及PARP1、活化的死亡激动剂（t-Bid）及Bid、泛素结合蛋白p62的表达情况。结果 与空白组比较，干预24 h，0.25 g·L^-1飞龙掌血醇提物组细胞存活率明显下降（P<0.05），0.5、1、2、4 g·L^-1飞龙掌血醇提物组细胞存活率显著下降（P<0.01）；48 h时0.25、0.5、1、2、4 g·L^-1飞龙掌血醇提物组细胞存活率呈浓度依赖性显著下降（P<0.01），且4 g·L^-1飞龙掌血醇提物细胞的存活率不到10%。流式细胞术结果显示，与空白组比较，0.5 g·L^-1飞龙掌血醇提物组细胞的总凋亡率明显增加（P<0.05），1、2 g·L^-1飞龙掌血醇提物组时细凋亡率显著增加（P<0.01）；与2 g·L^-1飞龙掌血醇提物组和3-MA组比较，3-MA联合飞龙掌血醇提物组凋亡率显著降低（P<0.01）。与空白组比较，1、2 g·L^-1飞龙掌血醇提物组促凋亡蛋白cleaved PARP1、Bax、t-Bid蛋白表达明显增加（P<0.05，P<0.01）；Bid蛋白表达在2 g·L^-1飞龙掌血醇提物组显著减少（P<0.01）；0.5、1、2 g·L^-1飞龙掌血醇提物组抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达明显减少（P<0.05，P<0.01）；0.5、1、2 g·L^-1飞龙掌血醇提物组p62的蛋白表达显著下调（P<0.01），LC3 Ⅱ蛋白表达显著上调（P<0.01），具有浓度依赖性。结论 飞龙掌血醇提物能显著抑制A549细胞的增殖，其机制可能与促进细胞自噬和诱导细胞凋亡，共同促进细胞死亡有关。

Effect of Toddalia asiatica Alcohol Extract on Apoptosis of Non-small Cell Lung Cancer A549 Cells Based on Autophagy Pathway