基于C1GALT1/C1GALT1C1通路探讨加味升降散对IgA肾病大鼠Gd-IgA1的影响

目的 通过观察加味升降散对免疫球蛋白（Ig）A肾病大鼠血清及肾组织中微小RNA-148b（miRNA-148b）、白细胞介素-6（IL-6）、核心1β1，3-半乳糖基转移酶（C1GALT1）、分子伴侣Cosmc（core1β3-Gal-T特异性分子伴侣，C1GALT1C1）、半乳糖缺乏IgA1（Gd-IgA1）表达的影响探讨其可能作用机制，为临床运用加味升降散治疗IgA肾病提供科学依据。方法 将42只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组8只、造模组34只，将大鼠适应性饲养1周后采用联合牛血清白蛋白（BSA）灌胃+尾静脉注射脂多糖（LPS）+皮下注射四氯化碳（CCl₄）、蓖麻油的免疫复合的方法建立实验性IgA肾病大鼠模型。造模完成后随机选取2只大鼠取材，检测造模是否成功。造模成功后，将造模组大鼠按照随机数字表法分成模型组、中药低剂量（加味升降散，6.27 g·kg^-1）组、中药高剂量（加味升降散，12.54 g·kg^-1）组、贝那普利（10 mg·kg^-1）组各8只，进行药物灌胃，1次/d，治疗4周。于实验第1周末、第9周末、第13周末检测24 h尿蛋白定量（24 h-UTP），第14周各组大鼠麻醉后取材，股动脉取血后离心取上清检测白蛋白（ALB）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检IL-6、Gd-IgA1表达水平变化；苏木素-伊红（HE）/马松（Masson）/碘酸六胺银（PASM）法观察肾组织病理改变；透射电镜观察肾小球超微结构变化；免疫组化法观察IL-6、C1GALT1、C1GALT1C1表达情况；免疫荧光观察肾小球系膜区；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）观察miRNA-148b、IL-6、C1GALT1、C1GALT1C1 mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测IL-6、C1GALT1、C1GALT1C1蛋白水平变化。结果 与正常组比较，模型组大鼠24 h-UTP、SCr、ALT、IL-6、Gd-IgA1含量水平明显升高（P<0.05），ALB含量水平明显降低（P<0.05）；肾小球系膜细胞增生、系膜区增厚、足细胞足突融合，大量颗粒状IgA免疫复合物沉积于肾小球系膜区；IL-6在系膜区、足细胞表达增强，C1GALT1、C1GALT1C1在系膜区、足细胞表达减弱；IL-6 mRNA、miRNA-148b表达增强（P<0.01），C1GALT1 mRNA、C1GALT1C1 mRNA表达减弱（P<0.01）；IL-6蛋白表达显著增强（P<0.01），C1GALT1、C1GALT1C1蛋白表达显著减弱，差异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较，加味升降散干预后，24 h-UTP、SCr、ALT、IL-6、Gd-IgA1含量水平显著降低，差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.01），ALB含量水平升高，差异具有统计学意义（P<0.05）；病理损害减轻；基底膜IgA免疫复合物沉积明显减少；IL-6在大鼠肾小球系膜区、足细胞的表达减弱，C1GALT1、C1GALT1C1在系膜区、足细胞表达增强；IL-6 mRNA、miRNA-148b表达减少（P<0.01），C1GALT1 mRNA、C1GALT1C1 mRNA表达增加（P<0.01）；IL-6蛋白表达明显减弱（P<0.05，P<0.01），C1GALT1、C1GALT1C1蛋白表达增强，差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；中药组表现出明显的量效趋势。结论 加味升降散可能通过降低IgA肾病大鼠血清及肾组织中miRNA-148b、IL-6表达，使C1GALT1、C1GALT1C1表达恢复，减少Gd-IgA1的生成，从而减轻肾脏病理损害，减少蛋白尿，发挥保护肾脏的作用，达到延缓疾病进展的目的，并且随剂量增加效果增强。