实时荧光定量PCR检测人粪便中空肠弯曲杆菌方法的建立与评价

目的：建立一种快速检测人粪便样本中空肠弯曲杆菌的实时荧光定量 PCR方法。方法根据空肠弯曲杆菌保守序列设计特异引物，建立空肠弯曲杆菌的实时荧光定量 PCR检测法。对该方法的线性范围、抗干扰能力进行考察。同时采用培养法和实时荧光定量 PCR法对150例粪便样本进行检测，以培养法检测结果作为参照标准，对实时荧光定量 PCR方法的灵敏度、特异度、准确度和重复性进行考察。采用 Kappa检验对两种检测方法的结果进行统计学分析。结果建立的实时荧光定量PCR方法标准曲线线性关系良好Y＝-3.51 Log（X）＋37.09，相关系数为0.996，理论检测下限为102 CFU/ml。抗干扰能力强，仅空肠弯曲杆菌出现特异性扩增曲线。与培养法相比，其灵敏度、特异度、准确度分别为92.4％，95.8％和94％；检测结果重复性良好（CV％＜5％）。统计学分析显示两种方法检测结果具有一致性，且一致性强度为极强（Kappa＝0.88，P＜0.05）。结论实时荧光定量PCR法能准确快速检测粪便样品中的空肠弯曲杆菌。

Establishment and Application of a Real-Time Quantitative PCR Assay for Detection of Campylobacter Jejuni in Human Feces