| 巨噬细胞炎性蛋白4的非融合表达载体的构建和表达 |
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| 作者姓名： | 李树钧 钱桂生 戚好文 黄桂君 |
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| 作者单位： | 第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所,全军呼吸病研究重点实验室,重庆,400037;第四军医大学西京医院呼吸内科,西安,710032 |
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| 摘 要： | 目的探索如何抑制嗜酸性粒细胞的趋化作用,选择β-趋化因子巨噬细胞炎性蛋白4(MIP4)的突变体(Met-MIP4)作为趋化因子受体3的拮抗剂,将Met-MIP4基因在原核细胞中进行非融合表达. 方法设计MIP4基因的PCR引物并进行氨基酸突变,将MIP4 N末端的丙氨酸突变为蛋氨酸.以正常人肺cDNA文库为模板,PCR方法获取Met-MIP4基因.克隆入载体pUC19,测序验证序列已得到突变.将正确的基因插入到非融合表达载体pBV220中进行表达.结果 PCR产物为220 bp左右的片段,连接入pUC19质粒后测序验证获得正确突变.构建的pBV220非融合表达载体在大肠杆菌DH5-α中表达,经Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳显示有大小约8×103的非融合蛋白表达.结论成功突变并克隆了β-趋化因子MIP4基因.Tricine-SDS-PAGE表明,非融合的Met-MIP4突变体已得到表达,为进一步研究其对哮喘的生物治疗奠定了基础.
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| 关 键 词： | 趋化因子 基因克隆 基因表达 表达载体 |
| 文章编号： | 1000-5404(2005)21-2111-04 |
| 收稿时间： | 2004-11-30 |
| 修稿时间： | 2005-04-12 |
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