大鼠局灶性脑缺血再灌注DNA损伤随再灌注时程在各脑区的动态分布

背景：近年来对于缺血半影区的研究，涉及脑组织血流量、能量代谢、蛋白质合成率、细胞凋亡以及相关蛋白质表达等多个方面，然而对于DNA单链与双链损伤的动态分布研究很少。目的：研究大鼠大脑中动脉缺血再灌注时，DNA损伤随再灌注时程在各脑区的动态分布情况。设计:随机对照的实验研究。地点和对象:本实验在华中科技大学同济医学院附属同济医院完成；选择健康纯系Wistar大鼠28只，体质量200～230g，雌雄各半，所有动物均由同济医学院动物饲养中心提供。干预:用线栓闭合大鼠大脑中动脉30min，然后分别再灌注30min，1，2，4，6，12，24，48h。采用原位PANT(DNA聚合酶Ⅰ介导的生物素标记的dATP缺口平移)及原位TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP末端标记)，分别检测DNA损伤的单链断裂及双链断裂。主要观察指标：观察单链断裂细胞和双链断裂细胞在大鼠前囟水平冠状切面的脑组织切片各区域的分布。结果：缺血30min(再灌注以前)各脑区均未检测到PANT或TUNEL阳性细胞。再灌注1h在尾壳核区检测到DNA单链断裂，再灌注2h在该区和梨状皮质检测到DNA双链断裂；再灌注24h以前各时间点DNA单链断裂和双链断裂细胞数依次增多，并且出现在顶叶皮质和额叶皮质，再灌注48h二者均减少；再灌注各时间点，分布在尾壳核和梨状皮质的PANT或TUNEL阳性细胞数量显著多于分布在额叶皮质及顶叶皮质的数量(P&;lt;0．05)。结论：大鼠大脑中动脉缺血30min再灌注的线栓模型，尾壳核和梨状皮质是受缺血影响的中心区域，额叶和顶叶皮质是受缺血影响相对较轻的区域，可能是缺血半影区。