| 人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定 |
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| 引用本文： | 窦金民,郭莉莉,刘宏磊,陈接根,黄海燕,宋后燕,汤其群. 人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定[J]. 复旦学报(医学版), 2005, 32(4): 419-422,426 |
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| 作者姓名： | 窦金民 郭莉莉 刘宏磊 陈接根 黄海燕 宋后燕 汤其群 |
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| 作者单位： | 复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室,上海,200032;复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室,上海,200032;复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室,上海,200032;复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室,上海,200032;复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室,上海,200032;复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室,上海,200032;复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室,上海,200032 |
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| 摘 要： | 目的表达和纯化人睫状神经营养因子(CNTF)并观察其生物学活性。方法用PCR方法构建人CNTF的结构基因,并克隆于pLy4原核表达载体中。将重组表达质粒pLy4-CNTF转化大肠埃希菌JF1125,30℃培养至A600(nm)达到0.6时,迅速升温至42℃诱导目的蛋白的表达。细菌经超声破胞,包涵体经变性、复性、透析和阴离子交换层析,获得纯化的CNTF重组蛋白。然后,用鸡胚背根神经节神经元细胞存活实验观察其生物活性。结果42℃诱导后可以获得Mr≈22.9×103的目的蛋白,Western印迹结果进一步表明,其具有人CNTF的抗原性。表达蛋白主要以不溶形式存在,占菌体蛋白的35%以上,表达产物经变性、复性,纯化后可获得纯度90%以上的目的蛋白。该重组蛋白能够促进鸡胚背根神经节神经元细胞的存活。结论在大肠埃希菌JF1125中成功表达了人CNTF分子,经变性、复性,纯化后得到具有生物活性的蛋白。
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| 关 键 词： | 人睫状神经营养因子 重组蛋白 表达与纯化 鸡胚背根神经节 |
| 修稿时间： | 2004-10-27 |
Cloning, Expression, Purification and Characterization of Recombinant Human Ciliary Neurotrophic Factor Genes |
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| DOU Jin-min,GUO Li-li,LIU Hong-lei,CHEN Jie-gen,HUANG Hai-yan,SONG Hou-yan,TANG Qi-qun. Cloning, Expression, Purification and Characterization of Recombinant Human Ciliary Neurotrophic Factor Genes[J]. Fudan University Journal of Medical Sciences, 2005, 32(4): 419-422,426 |
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| Authors: | DOU Jin-min GUO Li-li LIU Hong-lei CHEN Jie-gen HUANG Hai-yan SONG Hou-yan TANG Qi-qun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | human ciliary neurotrophic factor recombinant protein expression and purification dorsal root ganglion |
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