p-ERK下调分拣蛋白表达对非酒精性脂肪肝大鼠肝损伤的机制研究

目的基于磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）下调分拣蛋白（sortilin）表达,分别从动物和细胞水平探讨非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肝损伤的形成机制。方法40只8周龄雄性Wistar大鼠,适应性喂养1周后,随机分为：对照（control）组（n=10）、高脂饮食（HFD）组（n=10）、PD98059组（n=10）和HFD+PD98059组（n=10）;control组和PD98059组给予普通饲料喂养,HFD组和HFD+PD98059组给予高脂饲料喂养,PD98059组和HFD+PD98059组给予PD98059腹腔注射。喂养6周后处死大鼠,采集血清,检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、天冬氨酸转氨酶（AST）和丙氨酸转氨酶（ALT）的水平;分离肝脏,计算肝脏指数;苏木精-伊红（HE）染色检测肝脏组织的病理形态学改变;免疫组化检测蛋白的表达;六胺银染色观察肝窦基底膜的病理特征;ELISA法检测血清炎症因子白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达水平。同时,提取control组大鼠原代肝窦内皮细胞（LSECs）,anti-CD31鉴定LSECs,油红O染色观察LSECs脂质沉积,流式细胞术检测LSECs的凋亡,RT-qPCR和Westernblot技术分别从mRNA和蛋白水平检测相关蛋白的表达。结果sortilin表达在LSECs上,ox-LDL增加了LSECs脂滴的沉积和细胞的凋亡（P<0.05）;ox-LDL作用下sortilin的表达下调,抑制p-ERK（PD98059）后,sortilin表达显著升高。HFD诱导的NAFLD大鼠体重、血脂、肝功能和肝脏指数显著升高（P<0.05）,炎症因子IL-6和TNF-α的释放显著增多,PD98059干预可逆转上述指标的变化（P<0.05）。结论PD98059干预后,sortilin表达上调且p-ERK、TNF-α和IL-6的表达下调,同时NAFLD大鼠肝脏损伤、脂质蓄积、脂肪变性、炎症反应和细胞凋亡显著减轻。