一种生物膜表面唾液酸的染色和定量方法

目的建立一种细胞、组织和器官生物膜表面唾液酸的染色及定量方法。方法设计平行实验,确定最佳染色条件。将接种在盖玻片上的细胞用PBS洗涤后,加高碘酸钠（NaIO₄,1mmol/L）于4℃轻度选择性氧化生物膜表面的唾液酸在C-7位成醛;随后,加入甘油工作液终止氧化,再用冷的PBS清洗;再加入荧光素-5-氨基硫脲（FTSC,100μmol/L）荧光染料与生成的醛基避光反应,并采用PBS洗涤;最后,采用DAPI染核并采用PBS-T清洗,甘油封片、拍照,采用图像处理软件量化分析。组织切片经多聚甲醛固定后,按照上述优化后的步骤染色。结果平行实验结果显示,FTSC染色40min细胞表面唾液酸的成像效果最佳;3种不同的细胞经唾液酸染色后均呈现强的绿色荧光,经100μmol/LH₂O₂处理24h后,荧光强度显著降低（P<0.01）;该方法可原位检测小鼠组织切片和动脉内壁的唾液酸水平。假阳性结果可通过纳入仅采用FTSC处理组排除或扣除背景。结论该方法可对不同细胞、组织和器官表面的唾液酸进行原位染色及定量分析。