人分泌型Klotho蛋白在CHO细胞中的稳定表达 |
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引用本文: | 焦平,马杰,王文加,王建秋,王丁丁,张赢予,范伟全,颜炜群.人分泌型Klotho蛋白在CHO细胞中的稳定表达[J].中国老年学杂志,2006,26(11):1519-1521. |
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作者姓名: | 焦平 马杰 王文加 王建秋 王丁丁 张赢予 范伟全 颜炜群 |
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作者单位: | 吉林大学再生医学科学研究所,吉林,长春,130021 |
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摘 要: | 目的 在CHO细胞中稳定表达人分泌型Klotho(hsKL)蛋白,制备具有天然结构的重组hsKL(rhsKL)蛋白。方法 用PCR法自克隆载体pBS—hsk1中克隆hsKL DNA,构建真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)-hskl。经核酸测序确证后,阳离子聚合物转染CHO细胞。用PCR法筛选具有Zeocin抗性的阳性细胞克隆,SDS—PAGE(银染色)法确定CHO细胞分泌蛋白的分子量,Western印记法鉴定CHO细胞的培养上清液中的rhsKL蛋白,确定稳定转染细胞株CHO—hsKL。结果 经PCR法克隆的序列与Gene Bank登录的bskl mRNA序列一致。将hsKL DNA定向插入pcDNA3.1/Zeo(+),构建pcDNA3.1/Zeo(+).hsk1真核表达载体并通过阳离子聚合物转染CHO细胞获得Zeocin抗性的转染阳性克隆。SDS—PAGE和Western blot分析显示,转染的CHO培养上清中含有分子量约为66kDa的rhsKL蛋白。结论 首次实现天然结构的hsKL蛋白的重组表达——获得稳定表达细胞株CHO—hsKL。
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关 键 词: | 重组人分泌型Klotho(rhsKL)蛋白 CHO细胞 稳定转染 |
文章编号: | 1005-9202(2006)11-1519-03 |
收稿时间: | 2005-12-31 |
修稿时间: | 2006-04-13 |
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