重组幽门螺杆菌多表位疫苗工程菌株的构建及其微生物学特性研究

目的 构建含有幽门螺杆菌尿素酶（\ureI、ureB）及霍乱毒素B亚单位（\ctB）融合片段的多表位疫苗工程菌，并研究其微生物学特性。方法 通过生物信息学方法从\ureI、ureB基因中筛选出T细胞和B细胞优势表位，通过柔性Linker相连，并在其N端加入分子内佐剂序列\ctB，按照大肠杆菌BL21(DE3)的密码子偏好性进行密码子优化，即为BIB序列。人工合成之后，插入原核表达质粒pET28a(+)中，构建pET28a(+)/\ctB-ureI-ureB〔pET28a(+)/BIB〕重组质粒。经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序鉴定正确后，将质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中。BIB工程菌经乳糖诱导表达后，SDS-PAGE检测重组蛋白BIB的表达情况，并对其N端氨基酸序列和相对分子质量进行测定，Western blot对其进行抗原性鉴定。结果 原核表达质粒pET28a(+)/BIB经双酶切和测序鉴定构建正确，SDS-PAGE电泳显示在相对分子质量33×10^\3处有一条明显条带，其N端氨基酸序列和相对分子质量与设计序列100%一致，Western blot结果显示BIB可以与抗幽门螺杆菌悉尼株（SS1株）小鼠血清及鼠抗CTB单抗产生特异性反应。结论 成功构建了幽门螺杆菌多表位重组原核表达工程菌，该工程菌表达的BIB蛋白抗原性良好。

The New Bacteria Expressing Recombinant Multi-epitope Vaccine againstHelicobacter pylori and ItsMicrobiological Characteristics