| 摘 要： | 目的 探讨核因子-κB(NF-κB)介导肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对骨肉瘤增长的影响及其作用机制。方法 选取4~6周无特定病原体级Balb/c雄性裸鼠15只,数字表法随机分为人骨肉瘤MG63细胞组、人单核巨噬细胞系THP-1细胞组、MG63+THP-1混合细胞组3组,每组5只。于裸鼠右侧腋窝皮下注射浓度为1.0×108/mL的不同细胞悬液制备裸鼠成瘤模型:MG63细胞组裸鼠每只注射MG63细胞悬液0.2 mL,THP-1细胞组裸鼠每只注射THP-1细胞悬液0.2 mL,MG63+THP-1混合细胞组裸鼠每只注射MG63+THP-1混合细胞悬液(9∶1)0.2 mL。注射细胞后每天观察各组裸鼠是否出现移植瘤,从MG63组和MG63+THP-1混合细胞组均出现移植瘤当天开始,用游标卡尺测量移植瘤的长径和短径,并计算移植瘤体积,此后每5天测量1次,对比不同时间各组移植瘤生长情况;注射细胞后第25 天处死裸鼠,剥离移植瘤,对比各组移植瘤质量。将移植瘤置于10%甲醛中固定,制备石蜡切片,采用HE染色,观察各组移植瘤的肿瘤特征改变;采用免疫组织化学SP染色,观察各组移植瘤中核转录因子NF-κB蛋白的表达情况;采用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件定量分析比较各组移植瘤中NF-κB蛋白的表达水平。结果 THP-1细胞组裸鼠没有形成移植瘤。MG63+THP-1混合细胞组和MG63细胞组的裸鼠分别从注射细胞后第7 天、第10天开始腋窝皮下可触及移植瘤,且随时间增加,肿瘤体积逐渐增大;第10、15、20和25 天 MG63+THP-1混合细胞组裸鼠移植瘤体积分别为(474.4±56.1)、(945.0±79.7)、(2 886.0±462.3)、(3 319.6±388.4)mm3,均明显大于MG63细胞组的移植瘤体积(233.3±28.2)、(669.6±75.9)、(1 464.0±135.2)、(2 068.0±223.2)mm3,差异均有统计学意义(t=3.536、2.504、2.952、2.794, P值均＜0.05)。在种植细胞后第25天处死裸鼠,MG63+THP-1混合细胞组移植瘤质量(0.920±0.134)g,明显大于MG63细胞组(0.544±0.079)g,差异有统计学意义(t=2.404, P＜0.05)。移植瘤HE染色显示,MG63细胞组和MG63+THP-1混合细胞组移植瘤均可见明显的肿瘤特征改变。免疫组织化学SP染色显示,NF-κB蛋白在MG63细胞组和MG63+THP-1混合细胞组移植瘤组织和组织间隙均呈高表达状态;检测NF-κB蛋白表达水平,MG63+THP-1混合细胞组NF-κB蛋白吸光度值(0.362±0.006),明显大于MG63细胞组NF-κB蛋白吸光度值(0.326±0.006),差异有统计学意义(t=9.895, P＜0.05)。结论 TAMs可以促进骨肉瘤的增长,其作用机制可能与NF-κB蛋白高表达有关。
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