与雌、孕激素受体相关的微小RNA在Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌中的差异表达

目的 探讨与雌激素受体α(Erα)和孕激素受体(PR)表达相关的微小RNA(microRNA,miRNA)在Ⅰ型和Ⅱ型内膜癌中的差异表达.方法 通过对两种细胞系Ishikawa和KLE细胞的裸鼠移植瘤组织进行病理形态学观察、免疫组化法检测其Erα、PR和p53蛋白的表达以及活细胞计数(CCK-8)法检测雌、孕激素作用后Ishikawa和KLE细胞的生长情况,对Ishikawa和KLE细胞进行组织学分型及鉴定;对无雌、孕激素环境下培养的lshikawa和KLE细胞,用miRNA微阵列芯片筛选Ishikawa和KLE中差异表达的miRNA;用miRANDA和TargetScan软件结合芯片筛选结果,预测Ishikawa和KLE细胞中可能以ESRI(翻译产物为Erα蛋白)和PGR(翻译产物为PR蛋白)为靶基因的miRNA;用实时荧光定量PCR技术验证在体内和体外培养的lshikawa和KLE细胞中以及10例内膜癌患者癌组织标本中其表达的差异性.结果 经组织学分型及鉴定显示,lshikawa细胞来源于Ⅰ型内膜癌,KLE细胞来源于Ⅱ型内膜癌;miRNA微阵列芯片筛选出Ishikawa和KLE细胞中差异表达的miRNA共126个;可能以ESRI为靶基因的miRNA为has-miR-99a与has-miR-100,可能以PGR为靶基因的miRNA为has-miR-378与has-miR-768-3p;实时荧光定量PCR技术验证显示,has-miR-100、99a、378、768-3p在体外和体内培养的Ishikawa和KLE细胞中的差异表达与miRNA微阵列芯片筛选的结果是一致的;Ⅰ型内膜癌组织中has-miR-100的表达明显低于Ⅱ型内膜癌组织(P＜0.01).结论 has-miR-100在Ⅱ型内膜癌组织中的表达明显高于Ⅰ型内膜癌,其靶基因可能为ESR1.