缺氧诱导血管内皮细胞中长链非编码RNALINC01116的表达及其功能的初步研究

目的探讨缺氧条件下人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)LINC01116的表达及其在炎症分子表达调控中的作用。方法采用三气培养箱模拟缺氧环境(1%O_2),常氧对照组细胞于普通培养箱(21%O_2)中常规培养。采用实时荧光定量PCR检测LINC01116及各炎症分子的m RNA水平。Western blot检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1 alpha,HIF-1α)蛋白水平,并用葡萄糖转运体-1(glucose transporter 1,GLUT-1)的转录表达水平反映HIF-1的转录活性。免疫荧光法检测核转录因子NF-κB(nuclear factor of kappa B,NF-κB)活性亚基p65在细胞中的分布,并计算p65入核的细胞比例。结果 q RT-PCR的结果显示,缺氧条件下,LINC01116在HUVEC中持续高表达,与常氧对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01)。经脯氨酸羟化酶抑制剂(DMOG)和去铁酰胺(DFX)处理后,常氧培养HUVEC中HIF-1α蛋白表达和GLUT-1的转录表达增加,LINC01116表达增高,与溶剂对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01)。经YC-1和小干扰RNA处理后,缺氧培养HUVEC中HIF-1α蛋白表达和GLUT-1的转录表达下降,LINC01116的表达显著下降,与各对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01)。缺氧24 h时,HUVEC中炎症分子TNF-α、IL-1β、ICAM、E-SELECTIN的m RNA水平增加,干扰LINC01116表达后,上述炎症分子的m RNA水平显著降低(P<0.01)。免疫荧光的实验显示,缺氧24 h后,细胞核内p65的分布增加,而干扰LINC01116表达后,p65入核的细胞比例下降,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧通过HIF-1途径诱导血管内皮细胞LINC01116的表达增加;LINC01116可以通过调控p65入核,调节内皮细胞炎症分子的表达,参与介导缺氧血管内皮细胞炎症反应。

LINC01116 is induced in hypoxic vascular endothelial cells and regulates inflammatory reaction