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| Wnt7b重组反转录病毒载体的构建及其在C3H10T1/2中的表达 | |
| 引用本文： | 陈婷婷,徐选福,李晶华,李小艳,曹谊林,胡洪亮. Wnt7b重组反转录病毒载体的构建及其在C3H10T1/2中的表达[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2009, 13(20). DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.20.029 |
| 作者姓名： | 陈婷婷 徐选福 李晶华 李小艳 曹谊林 胡洪亮 |
| 作者单位： | 1. 同济大学附属第十人民医院内科,上海市,200072 2. 同济大学附属第十人民医院检验医学中心实验室,上海市,200072 3. 交通大学附属第九人民医院,上海市,200072 4. 同济大学附属第十人民医院内科,上海市200072;同济大学附属第十人民医院检验医学中心实验室,上海市200072 |
| 摘 要： | 背景:诱导骨髓基质干细胞成骨条件的优化与探讨是再生医学研究的热点.前期实验发现Wnt7b在骨发育中的作用,此次实验是前期工作的延续.目的:构建Wnt7b重组反转录病毒载体,观察其在C3H10T1/2中的表达.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-01/2008-08在华盛顿大学医学院和同济大学附属第十人民医院中心实验室完成.材料:pXy-Wnt7b购于ATCC公司,载体pCIG-IRES-EGFP,pLef-Luciferase.pCMV-Rennilla.反转录病毒载体pSFG和包装细胞GP293由华盛顿大学医学院提供.方法:用多步亚克降技术构建目的基因Wnt7b和标记基因加强型绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescentprotein,EGFP)双表达重组反转录病毒载体pSFG-Wnt7b-IRES-EGFP,在条件培养液中经GP293包装,并任常规培养液中释放出假病毒并将其转染C3H10T1/2细胞,检测成骨活性诱导中的作用和荧光素酶报告基因检测信号转导通路.主要观察指标:①Wnt7b重组反转录病毒转染C3H 10T1/2细胞的表达.②wnt7b诱导C3H 10T1/2碱性磷酸酶生成分析.③Wnt7b信号转导分析.结果:构建日的基因的Wnt7b和标记基因EGFP双表达重组反转录病毒载体能够高效地表达,转染C3H10T1/2细胞后能诱导碱性磷酸晦的生成.Wnt7b信号转导分析可见Wnt7b成骨作用通过Noncanonical途径.结论:Wnt7b在C3H10T1/2中能高效表达,能显著诱导骨发育的重要标志--碱性磷酸酶的生成,Noncanonical途径在其中起重要作用. |
| 关 键 词： | 加强型绿色荧光蛋白 骨生成 |
Construction of Wnt7b recombinant retrovirus vector and its expression in C3H10T1/2 cells |
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| Chen Ting-ting,Xu Xuan-fu,Li Jing-hua,Li Xiao-yan,Cao Yi-lin,Hu Hong-liang. Construction of Wnt7b recombinant retrovirus vector and its expression in C3H10T1/2 cells[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2009, 13(20). DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.20.029 | |
| Authors: | Chen Ting-ting Xu Xuan-fu Li Jing-hua Li Xiao-yan Cao Yi-lin Hu Hong-liang |
| Abstract: | |
| Keywords: | Wnt7b C3H10T1/2 |
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