| 基于分子生物学特异性扩增的方法鉴别菲牛蛭 |
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| 引用本文： | 过立农,刘杰,杨宝,昝珂,郑健,马双成,马宁,李昀铮.基于分子生物学特异性扩增的方法鉴别菲牛蛭[J].中国药事,2018,32(9):1239-1244. |
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| 作者姓名： | 过立农 刘杰 杨宝 昝珂 郑健 马双成 马宁 李昀铮 |
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| 作者单位： | 中国食品药品检定研究院, 北京 100050,中国食品药品检定研究院, 北京 100050;中央民族大学, 北京 100081,太原市食品药品检验所, 太原 030000,中国食品药品检定研究院, 北京 100050,中国食品药品检定研究院, 北京 100050,中国食品药品检定研究院, 北京 100050,太原市食品药品检验所, 太原 030000,松原市食品药品检验所, 松原 138000 |
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| 基金项目： | 中药饮片质量保障体系研究（一）（编号201507002） |
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| 摘 要： | 目的：通过DNA条形码鉴定和建立特异性引物扩增的方法，有效区分菲牛蛭与其他水蛭品种。方法：通过聚合酶链式反应（PCR）对水蛭样品的COI序列进行扩增，利用MEGA 6.06软件通过建树法进行NJ树聚类分析，针对菲牛蛭素的编码基因序列、利用Primer Premier 5软件进行引物设计，对经设计、合成的8对引物通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳实验进行筛选，并确定特异性引物的最佳退火温度。结果：通过COI序列的NJ树聚类分析可以确定20批水蛭样品中的9批菲牛蛭样品，经过Primer Premier 5软件进行引物设计共选出8对引物进行合成，通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳预实验筛选出引物7、为最佳实验引物，且确定了引物7的最佳退火温度为49℃。结论：通过COI序列的DNA条形码研究，确定了样品中的菲牛蛭，通过特异性引物PCR扩增和电泳检测，有效地将菲牛蛭与其他水蛭样品进行区分，为菲牛蛭的分子生物学鉴定方法提供了参考。
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| 关 键 词： | 菲牛蛭 聚合酶链式反应(PCR) COI DNA条形码 特异性扩增 |
| 收稿时间： | 2018/3/20 0:00:00 |
On the Identification Method of Poecilobdella manillensis Based on Molecular Biological Specific Amplification |
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| Guo Linong,Liu Jie,Yang Bao,Zan Ke,Zheng Jian,Ma Shuangcheng,Ma Ning and Li Yunzheng.On the Identification Method of Poecilobdella manillensis Based on Molecular Biological Specific Amplification[J].Chinese Pharmaceutical Affairs,2018,32(9):1239-1244. |
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| Authors: | Guo Linong Liu Jie Yang Bao Zan Ke Zheng Jian Ma Shuangcheng Ma Ning and Li Yunzheng |
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| Institution: | National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050, China,National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050, China;Minzu University of China, Beijing 100081, China,Taiyuan Institute for Food and Drug Control, Taiyuan 030000, China,National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050, China,National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050, China,National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050, China,Taiyuan Institute for Food and Drug Control, Taiyuan 030000, China and Songyuan Institute for Food and Drug Control, Songyuan 138000, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Poecilobdella manillensis polymerase chain reaction (PCR) cytochrome oxidase subunit I (CO1) DNA barcoding specific amplification |
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