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利用CRISPR/Cas9系统建立斑马鱼Morn3基因敲除模型
引用本文:曾婧,刘晗,李为,Hept Megan,Lister James A,张玲,张志兵. 利用CRISPR/Cas9系统建立斑马鱼Morn3基因敲除模型[J]. 重庆医科大学学报, 2018, 43(11): 1449-1452
作者姓名:曾婧  刘晗  李为  Hept Megan  Lister James A  张玲  张志兵
作者单位:1. 武汉科技大学医学院公共卫生学院,“职业危害识别与控制”湖北省重点实验室,武汉 430065;2. Department of Obstetrics & Gynecology,Wayne State University,Detroit,MI,48201,USA;3. Departments of Human & Molecular Genetics,Virginia Commonwealth University,Richmond,VA,23298,USA.
摘    要:目的:采用高效基因编辑系统CRISPR/Cas9对斑马鱼的Morn3基因进行编辑,以期建立Morn3基因敲除斑马鱼模型。方法:针对斑马鱼Morn3基因用生物信息学选取靶位点,构建gRNA表达载体并体外转录,将gRNA和Cas9mRNA混合物显微注射到斑马鱼单细胞期的受精卵中,24~48 h提取基因组DNA,PCR扩增出目的片段,限制性酶切法初步检测基因打靶情况,最后进行测序分析确定编辑效果。结果:取3个靶位点(M1、M2、M3)进行试验,选择gRNA浓度较高的M2和M3进行注射。限制性酶切及测序的结果显示M3已产生基因编辑效应。结论:本研究通过CRISPR/Cas9系统成功获得Morn3基因编辑的突变体,为进一步探讨Morn3基因的作用提供研究基础。

关 键 词:CRISPR/Cas9;Morn3;斑马鱼;基因编辑

Morn3 knockout zebrafish model established by the CRISPR/Cas9 system
Zeng Jing,Liu Han,Li Wei,Hept Megan,Lister James A,Zhang Ling,Zhang Zhibing. Morn3 knockout zebrafish model established by the CRISPR/Cas9 system[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2018, 43(11): 1449-1452
Authors:Zeng Jing  Liu Han  Li Wei  Hept Megan  Lister James A  Zhang Ling  Zhang Zhibing
Abstract:
Keywords:
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