神经肽Y/Y1受体激活β⁃catenin信号通路介导心肌细胞损伤

目的：研究神经肽Y（neuropeptide Y，NPY）/Y1受体信号转导在心肌细胞损伤中的作用及机制。方法：C57BL/6J小鼠皮下注射异丙肾上腺素（isoprenaline，ISO）构建心肌损伤模型，腹腔注射Y1受体特异性拮抗剂BIBO3304干预。小鼠随机分为对照组（生理盐水）、ISO组［20 mg/（kg·d）ISO］、BIBO3304+ISO组［0.1 mg/（kg·d）BIBO3304+20 mg/（kg·d）ISO］、BIBO3304组 ［0.1 mg/（kg·d）BIBO3304］，每组10只，连续给药14 d。实时定量PCR和Western blot检测小鼠心肌组织中NPY表达。HE染色和Masson染色观察各组小鼠心肌纤维结构变化和纤维化程度；定量PCR检测小鼠心肌肥大基因心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide，ANP）、β-肌球蛋白重链（β-myosin heavy chain，β-MHC）mRNA表达。采用Y1受体特异性激活剂［Leu31，Pro34］-NPY刺激 H9C2 细胞，检测 ANP、β-MHC mRNA 表达；CCK-8 检测心肌细胞活力。Western blot 检测各组小鼠心肌组织和 H9C2 细胞中 active β-catenin、磷酸化糖原合成酶激酶-3β（phospho-glycogen synthesis kinase 3β，p-GSK3β）、总糖原合成酶激酶-3β（total glyco- gen synthesis kinase 3β，t-GSK3β）蛋白表达。免疫荧光染色检测心肌细胞β-catenin 入核情况。利用β-catenin 特异性抑制剂 ICG001处理细胞，检测［Leu31，Pro34］-NPY诱导的心肌细胞肥大和细胞活力变化。结果：与对照组比较，ISO组小鼠心肌组织 NPY mRNA 和蛋白表达均显著增加（P < 0.05），心肌纤维排列紊乱，心肌纤维化程度高，心肌肥大基因表达增加。与 ISO 组比较，BIBO3304+ISO组小鼠心肌损伤和纤维化得到有效缓解，心肌肥大基因表达下降（P < 0.01）。与对照组比较，［Leu31， Pro34］-NPY 增加 H9C2 细胞 ANP、β-MHC mRNA 表达，降低心肌细胞活力（P < 0.01）。与对照组比较，ISO 组小鼠心肌组织 active β-catenin、p-GSK3β表达明显上调，p-GSK3β/t-GSK3β增加；与 ISO 组比较，BIBO3304+ISO 组心肌组织 active β-catenin、 p-GSK3β表达降低（P < 0.05）。与对照组比较，［Leu31，Pro34］-NPY 显著增加心肌细胞 active β-catenin、p-GSK3β表达（P < 0.05），促进细胞核β-catenin 积累。与［Leu31，Pro34］-NPY 组比较，BIBO3304 抑制细胞核β-catenin 表达，ICG001 显著缓解 ［Leu31，Pro34］-NPY诱导的心肌细胞肥大和细胞活力下降（P < 0.01）。结论：NPY通过Y1受体转导激活β-catenin信号通路介导心肌细胞损伤和心肌纤维化。