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超声微泡破碎技术促进人MxA基因在小鼠肝脏转染的实验研究
作者姓名:刘爱平  赵瑞秋  蔡丽君  周方  冉海涛  任红  许红梅
作者单位:1.重庆医科大学儿童医院感染消化科;2.重庆医科大学超声研究所;3.重庆医科大学病毒性肝炎研究所
摘    要:目的:观察静脉注射基因和微泡声学造影剂,同时经皮超声辐照肝脏的方式是否能增强外源MxA基因在小鼠肝脏中的定位表达,并探讨不同辐照参数对该基因表达的影响。方法:(1)不同转染方法对转染效率的影响:采用昆明小鼠24只,随机分为4组。分别为质粒转染组、微泡+质粒组、超声+质粒组和微泡+超声+质粒组。7d后分别取肝、心、脾、肾、肺和骨骼肌,采用间接免疫荧光法进行MxA蛋白的半定量检测。(2)不同辐照参数对基因表达的影响:采用昆明小鼠20只,随机分为4组。按转染不同超声辐照声强分为0.25W/cm2组、0.5W/cm2组、0.75W/cm2组和1.0W/cm2组。7d后分别取肝组织,采用间接免疫荧光法进行MxA蛋白的半定量检测。结果:(1)肝脏每高倍视野表达阳性细胞数在微泡+超声+质粒组最高,其次为超声+质粒组,再次为微泡+质粒组,表达最少的为质粒组;各组间两两比较,均有显著统计学差异(P<0.001);超声+微泡+质粒组中检测发现,脾组织偶有MxA表达阳性细胞,其余各组仅在肝组织存在MxA表达。(2)肝脏每高倍视野表达阳性细胞数0.5W/cm2组最高,其次为0.75W/cm2组,再次为1.0W/cm2组,0.25W/cm2组表达最少;各组间两两比较,均有显著统计学差异(P<0.001)。结论:超声微泡破碎技术能显著增强外源MxA基因在小鼠肝脏中的靶向性表达;超声辐照频率不变的条件下,在一定范围内增加声强,能促进外源MxA基因在小鼠肝脏表达;当声强为0.5W/cm2时,转染率最高;该技术生物安全性好,为肝脏疾病的基因治疗提供了一项高效、安全的转染技术。

关 键 词:微泡声学造影剂  超声  基因转染  辐照参数
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