| 人Bcl-2基因重组腺病毒的构建及其在螺旋神经节细胞中的表达 |
| |
| 引用本文： | 罗凌惠,龚树生,宋鹏,鄢开胜,刘英鹏. 人Bcl-2基因重组腺病毒的构建及其在螺旋神经节细胞中的表达[J]. 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志, 2005, 40(7): 513-516 |
| |
| 作者姓名： | 罗凌惠 龚树生 宋鹏 鄢开胜 刘英鹏 |
| |
| 作者单位： | 430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30471879)，湖北省卫生厅科研基金资助项目(JXIBO56) |
| |
| 摘 要： | 目的构建表达人Bcl-2基因的重组腺病毒，并研究其在原代培养螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells，SGC)的表达特性。方法采用细菌内同源重组法，从pUC-CAGGS,／Bcl-2质粒中获得人Bcl-2 cDNA，克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上，后者和腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在细菌内同源重组，在HEK293细胞中包装成为重组Ad增强型绿色荧光蛋白／Bcl-2腺病毒，电镜观察病毒颗粒，用病毒感染原代培养的大鼠螺旋神经节细胞，在荧光显微镜下观察感染效率，用逆转录聚合酶链反应方法检测Bcl-2基因在螺旋神经节细胞的转录表达，用Western Blot检测其蛋白的表达。结果经酶切鉴定证实重组腺病毒质粒构建成功，电镜显示包装细胞中有大量病毒颗粒存在，呈规则六边形。荧光显微镜下观测到感染病毒的SGC细胞发出明亮的绿色荧光。分别在mRNA水平及蛋白水平证实有外源性Bcl-2基因的表达。结论细菌内同源重组法是一种简便、高效的制备方法。构建的重组Ad增强型绿色荧光蛋白／Bcl-2腺病毒能有效的感染SGC，并可在SGC中正确地转录和翻译，为进一步研究腺病毒介导的Bcl-2基因对螺旋神经节损伤的保护作用奠定基础。
|
| 关 键 词： | 螺旋神经节细胞 基因重组腺病毒 增强型绿色荧光蛋白 Bcl-2基因 细菌内同源重组法 HEK293细胞 聚合酶链反应方法 Western 螺旋神经节损伤 显微镜下观察 Blot检测 mRNA水平 原代培养 病毒颗粒 cells 腺病毒介导 构建表达 |
| 修稿时间： | 2004-09-16 |
Construction of recombinant adenovirus containing human Bcl-2 and its expression in the spiral ganglion cells |
| |
| LUO Ling-hui,GONG Shu-Sheng,Song Peng,YAN Kai-sheng,LIU Ying-peng. Construction of recombinant adenovirus containing human Bcl-2 and its expression in the spiral ganglion cells[J]. Chinese journal of otorhinolaryngology head and neck surgery, 2005, 40(7): 513-516 |
| |
| Authors: | LUO Ling-hui GONG Shu-Sheng Song Peng YAN Kai-sheng LIU Ying-peng |
| |
| Affiliation: | Department of Otorhinolaryngology, Union Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430022, China. |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Bcl-2 Adenovirus Spiral ganglion Neurons Primary culture |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
