人IgE重链3-4区蛋白的表达、纯化及功能分析

目的通过基因重组的方法表达IgECε3-Cε4区，鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FcεRⅠ之间的相互作用．并用重组蛋白免疫小鼠制备血清。方法用RT—PCR方法从过敏性疾病病人外周血淋巴细胞调取IgECε3-Cε4cDNA片段，克隆至pET28a（＋）构建原核表达载体IgECε3-Cε4-pET28a（＋），将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3），诱导表达IgECε3-Cε4区蛋白，通过Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白后，用免疫荧光方法鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FcεRⅠ之间的结合能力，并用UniCAP100全自动分析检测仪对重组抗原进行定量检测与鉴定：用表达蛋白免疫BALB／c小鼠，制备抗鼠血清，用Western—blot法对多克隆抗体进行鉴定。结果成功调取的人IgECε3-Cε4区基因与已报道的序列相一致；获得的IgECε3-Cε4区蛋白相对分子质量（Mr）同预期的结果相一致；IgECε3-Cε4能特异性结合人嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠ受体；通过UniCAP 100全自动分析检测仪能够检测到重组抗原并精确到国际单位；免疫鼠血清多抗能特异性结合天然人血清IgE。结论成功构建了IgECε3-Cε4-pET28a（＋）表达载体，获得了能被人嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠα亚基特异性识别的IgECε3-Cε4区蛋白．并用天然人血清IgE鉴定了多克隆抗体，为下一步单克隆抗体的制备打下了基础。