幽门螺杆菌胶原蛋白酶HpPrtC的表达、纯化及结晶尝试

目的原核表达、纯化并筛选幽门螺旋菌胶原蛋白酶的结晶条件。方法通过基因重组构建幽门螺杆菌hp0169基因重组表达质粒,在大肠埃希菌进行重组蛋白的原核表达;经Ni 2+亲和层析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析纯化蛋白;通过Hampton Research结晶试剂盒筛选蛋白结晶条件。结果扩增的幽门螺杆菌hp0169基因片段略大于1 000bp,构建重组质粒pET-28a-hp0169,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)菌株后以IPTG诱导表达该U32家族蛋白酶HpPrtC;亲和层析,离子交换及凝胶过滤层析纯化的目标蛋白经SDS-PAGE鉴定为HpPrtC蛋白单体和二体,分子质量单位(Mr)为50×103和100×103,但以单体形式为主。使用结晶机器人筛选HpPrtC蛋白的初始结晶条件为0.2mol/L MgCl2,0.1mol/L Tris,pH 8.5,3.4mol/L己二醇。结论 HpPrtC可在大肠埃希菌中可溶性表达,并具有较好的可结晶性,为其结构与功能研究奠定了基础。