帕金森病基因治疗的理论：VMAT2基因的表达及其对MN9D细胞多巴胺代谢的影响

目的：获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体(vesicular monoamine transporter-2，VMAT2)基因，转染至MN9D细胞，通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2基因促进单胺类递质循环利用的效应。方法：从人胎脑中提取总RNA，RT-PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于pGEM—Easy-T载体中，进行全序列测定。重组真核表达载体pBK-RSV-VMAT2，转染MN9D细胞，免疫细胞化学检测VMAT2的表达，HPLC检测细胞内外单胺类递质含量的变化。结果：RT-PCR扩增到1637bp的带有Kozak序列的eDNA片段。原位杂交证实pAAV-VMAT2能在COS7细胞表达；免疫组化证实转基因的MN9D细胞(实验组)、MAT2免疫着色明显高于对照组。HPLC结果表明实验组中细胞内外的多巴胺含量分别升高至(227．2&;#177;20．8)％和(302．6&;#177;15．7)％(P&;lt;0．01)，而细胞外HVA、DOPAC分别降低至(48．1&;#177;5．3)％和(55．7&;#177;4．9)％(P&;lt;0．05)，细胞内HVA，DOPAC分别升高至(332．1&;#177;28．2)％和(1176．8&;#177;82．5)％(P&;lt;0．01)。结论：克隆了VMAT2cDNA片断，可在真核细胞中表达。该基因的过表达可促讲多巴胺的循环利用．有望用于帕余森病的基因治疗。