miR-206在大鼠肺动脉高压模型中的表达和意义

目的 探讨miR-206在大鼠肺动脉高压（pulmonary hypertension,PH）模型中的表达和意义。 方法 构建肺动脉高压大鼠模型,按缺氧暴露时间分别标记为(1、7、14、21和28 d)组,并将常压常氧（FIO₂为0.21）作为对照组（n = 5）,提取大鼠右下肺叶组织及外周血,实时定量PCR检测miR-206表达;分离大鼠原代肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMC）,以miR-206 mimics转染细胞并进行缺氧暴露,检测细胞增殖能力。生物信息学分析发现并选择缺氧诱导因子（hypoxia-inducible factor,HIF）-1α作为miR-206的候选靶基因,以双荧光素酶报告实验验证miR-206是否可直接调控HIF-1α,共转染miR-206mimics与HIF-1α过表达质粒,检测PASMC细胞增殖能力变化。 结果 与对照组相比,大鼠肺组织中miR-206的表达在缺氧暴露后即可出现miR-206表达降低（P < 0.05）,大鼠血清miR-206亦明显降低（P < 0.05）;缺氧暴露后的大鼠肺组织分离培养的PASMC miR-206表达与对照组相比也明显降低（P < 0.05）,miR-206低表达时PASMC增殖能力明显增加（P < 0.05）;miR-206 mimics转染可拮抗因缺氧暴露引起的PASMC增殖能力增加（P < 0.05）。生物信息学发现HIF-1α的3’非编码区（3’ untranslated region,3'UTR）具有miR-206的结合位点,用miR-206和HIF-1α（野生型3'UTR）共转染的PASMC中荧光素酶报告基因活性较对照组显著下调（P < 0.05）,而miR-206 mimics和HIF-1α（突变型3'UTR）共转染组则较对照组无明显统计学差异。共转染miR-206 mimics后,HIF-1α上调引起的细胞增殖被逆转（P < 0.05）。 结论 缺氧诱导的miR-206下调通过靶向PASMC中的HIF-1α途径来促进PH,miR-206可能是缺氧诱导PH早期的触发因素。