| 肺炎克雷伯菌基因无痕敲除方法的建立 |
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| 引用本文： | 高钰双,冯甜,邱景富,杨瑞馥,周冬生,李迎丽.肺炎克雷伯菌基因无痕敲除方法的建立[J].军事医学科学院院刊,2013,37(6). |
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| 作者姓名： | 高钰双 冯甜 邱景富 杨瑞馥 周冬生 李迎丽 |
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| 作者单位： | 1. 重庆医科大学公共卫生与管理学院,重庆,400016
2. 军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京100071 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，重庆市科委自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 建立可行的肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)基因无痕敲除方法.方法 PCR扩增得到目的基因上下游同源臂融合片段,将其克隆到自杀载体pKO3-km,构建重组质粒.提取重组质粒,通过电转化转入肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中,在43℃条件下培养筛选得到重组质粒整合到细菌基因组上的重组子,再利用质粒pKO3-km上的sacB基因在含蔗糖的平板上反向筛选得到突变株.结果与结论 成功构建突变株,且突变株基因组上没有任何抗性筛选标记残留.该研究为肺炎克雷伯菌基因功能研究提供了基因敲除技术.
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| 关 键 词： | 克雷伯菌 肺炎 cAMP受体蛋白 基因敲除 自杀载体 同源重组 |
A method for constructing unmarked deletion mutants of Klebsiella pneumoniae |
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| GAO Yu-shuang
,
FENG Tian
,
QIU Jing-fu
,
YANG Rui-fu
,
ZHOU Dong-sheng
,
LI Ying-li.A method for constructing unmarked deletion mutants of Klebsiella pneumoniae[J].Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences,2013,37(6). |
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| Authors: | GAO Yu-shuang FENG Tian QIU Jing-fu YANG Rui-fu ZHOU Dong-sheng LI Ying-li |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Klebsiella pneumoniae cAMP receptor protein gene knockout suicide vector homologous recombination |
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