| 弓形虫ZS株P22基因片段的克隆、表达与融合蛋白的纯化 |
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| 引用本文： | 陈义忠,章涛,彭碧文,黄清玲,林建银.弓形虫ZS株P22基因片段的克隆、表达与融合蛋白的纯化[J].福建医科大学学报,2003,37(2):133-136. |
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| 作者姓名： | 陈义忠 章涛 彭碧文 黄清玲 林建银 |
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| 作者单位： | 1. 福建医科大学分子医学研究中心,福州,350004
2. 武汉大学医学院生理学教研室,武汉,430071 |
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| 摘 要： | 目的 克隆弓形虫ZS株表面抗原P22编码基因，构建原核重组表达质粒pThioHieA，B，C／P22，并在大肠杆菌(Top10)中进行表达及纯化融合蛋白。方法 PCR扩增及限制性内切酶Pst Ⅰ和Bgl Ⅱ双酶切496bp的弓形虫表面抗原P22编码基因目的片段，胶回收纯化，插入表达质粒裁体pThioHisA，B，C多克隆位点，构建置组体pThioHisA，B，C／P22，并转化大肠杆菌(E.coli)Topl0，筛选阳性克隆，以限制性酶切分析及测序鉴定后，以异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)进行诱导，在E.coli Top10中表达，用SDS-PAGE与免疫印迹分析表达产物并纯化．结果 PCR扩增出约496bp的P22编码基因目的片段，与预期片段大小相符；所构建的pThioHisA，B，C／P22重组体阳性克隆经双酶切与测序鉴定，与预期结果一致；SDS—PAGE与免疫印迹显示，表达融合蛋白产物约35．4kD．结论 成功构建弓形虫ZS株表面抗原P22编码基因pThioHisA，B，C／P22表达质粒，诱导表达弓形虫表面抗原P22蛋白，并纯化该融合蛋白。
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| 关 键 词： | 弓形虫 鼠 克隆 分子 基因表达 重组融合蛋白质类 抗原 原虫 质粒 |
| 文章编号： | 1672-4194(2003)02-0133-04 |
| 修稿时间： | 2003年2月25日 |
Cloning and Expression of the P22 Gene Fragment of Toxoplasma Gondii and Purification of the Fusion Protein in ZS Strain |
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| CHEN Yi\|zhong\,ZHANG Tao\,PENG Bi\|wen\,HUANG Qing\|ling\,LIN Jian\|yin\ .Research Center of Molecular Medicine,Fujian Medical Unversity,Fuzhou ,China.Cloning and Expression of the P22 Gene Fragment of Toxoplasma Gondii and Purification of the Fusion Protein in ZS Strain[J].Journal of Fujian Medical University,2003,37(2):133-136. |
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| Authors: | CHEN Yi\|zhong\ ZHANG Tao\ PENG Bi\|wen\ HUANG Qing\|ling\ LIN Jian\|yin\ Research Center of Molecular Medicine Fujian Medical Unversity Fuzhou China |
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| Institution: | CHEN Yi\|zhong\+1,ZHANG Tao\+1,PENG Bi\|wen\+2,HUANG Qing\|ling\+1,LIN Jian\|yin\+1 1.Research Center of Molecular Medicine,Fujian Medical Unversity,Fuzhou 350004,China 2.Department of Physiology,Medical College of Wuhan University,Wuhan 430071,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Toxoplasma gondii clone molecule gene expression recombination fusion proteins antigen protozoon plasmid |
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