神经纤毛蛋白-1及血管内皮生长因子促HaCaT细胞增殖的研究

【摘要】 目的 探讨神经纤毛蛋白-1（neuropilin-1，NRP-1）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）在血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor ,VEGF）促HaCaT 细胞增殖中的可能机制。方法 培养HaCaT细胞，转染NRP-1质粒EX-O0008-M02，采用逆转录（RT）-PCR法检测转染后NRP-1 mRNA表达，蛋白免疫印迹法检测NRP-1蛋白质表达。将部分培养的HaCaT细胞分为脂质体对照组、对照质粒组以及目的质粒组分别予以脂质体、对照质粒pReceiver-M02及目的质粒EX-O0008-M02转染，各组分别加入PBS、MEK1/2抑制剂（U0126）、VEGF或U0126联合VEGF进行处理后，噻唑蓝（MTT）法检测HaCaT细胞增殖的改变，蛋白免疫印迹法观察ERK1/2的磷酸化情况以及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况。采用One-way ANOVA 检验组间差异，LSD法进行多重比较和校正。结果 RT-PCR和蛋白免疫印迹实验结果提示EX-O0008-M02质粒转染可有效促进HaCaT细胞NRP-1 mRNA及其蛋白质的表达。与脂质体对照组（A570值0.63 ± 0.07）及对照质粒组（A570值0.62 ± 0.13）比较，目的质粒组HaCaT细胞增殖活性（A570值0.88 ± 0.14）明显增强，F = 8.755，P < 0.05。与对照质粒VEGF刺激组（A570值0.88 ± 0.10）比较，目的质粒VEGF刺激组HaCaT细胞的增殖活性（A570值1.14 ± 0.18）亦明显增强，F = 4.591，P < 0.05。与目的质粒VEGF刺激组比较，U0126预处理可以明显抑制VEGF对HaCaT细胞的促增殖作用（A570值0.50 ± 0.13，F = 42.106，P < 0.01）。蛋白免疫印迹结果提示与对照质粒转染细胞比较，目的质粒转染后VEGF对HaCaT细胞ERK1/2的促磷酸化及促PCNA表达得到明显提高，然而此作用可以被U0126有效抑制。结论 ERK1/2信号通路的激活在NRP-1蛋白介导的VEGF促HaCaT细胞增殖作用中可能发挥关键性作用。 【关键词】 神经纤毛蛋白质1； 角蛋白细胞； 血管内皮生长因子类； 糖尿病足

Promotive effect of neuropilin-1 and vascular endothelial growth factor on the proliferation of HaCaT cells